[发明专利]一种稻曲病菌薄壁分生孢子的平板培养制备方法

摘要

本发明公开了一种稻曲病菌薄壁分生孢子的平板培养制备方法。该方法的核心是，直接用薄壁分生孢子，在平板培养基上培养繁殖新的薄壁分生孢子。该方法的步骤如下：1）初始薄壁分生孢子液的制备；2）产孢培养基平板的制备；3）产孢培养；4）新的薄壁分生孢子的收集；5）孢子纯化处理。本发明的优点是，培养制备过程时间较短，一般仅需要4～6天；操作简易便捷，无需振荡培养设备；所获得的培养产物中的薄壁分生孢子主要是同一世代的孢子；孢子液质量较高，无需相关的净化处理也适合许多研究工作的使用。

主权项

一种稻曲病菌薄壁分生孢子的平板培养制备方法，其特征在于，操作步骤如下：1)初始薄壁分生孢子液的制备：a）初始薄壁分生孢子的来源：采用大家熟知的二期培养方法，用菌丝体通过振荡培养方式，获得含有大量薄壁分生孢子的培养产物；或者采用培养田间病稻粒上的新鲜厚壁分生孢子的方法，获得含有大量薄壁分生孢子的培养产物；b)孢子纯化处理：将获得的薄壁分生孢子的培养产物进行孢子纯化处理，纯化处理方法是，用2层纱布过滤去除培养产物中的菌丝；然后将过滤液进行离心并收集沉淀孢子；接着用无菌水将沉淀孢子悬浮洗涤，再进行一次离心，获得纯净的孢子团，用无菌水将孢子团悬浮分散均匀即成为薄壁分生孢子液，保存备用；2)产孢培养基平板的制备：采用PSA培养基的半量成分作为产孢培养基，产孢培养基为：马铃薯100g；蔗糖10g；琼脂20g；水1000ml，通过常规灭菌后倒成培养皿平板，即制成产孢培养用的产孢平板；3)产孢培养：取步骤1)保存备用的薄壁分生孢子液，滴于备好的产孢培养基平板面上，用平滑的玻璃棒抹涂平板面，使孢子充分均匀分布于平板面上，回盖后转入温度为28℃条件下培养5天；4)新的薄壁分生孢子的收集：上步骤培养5天后，产孢培养基平板上长出大量直径约为0.5～1.5mm的产生薄壁分生孢子的小菌落，此时收集新的薄壁分生孢子；收集方法是，取清水注在产孢平板面上，然后用普通毛刷洗刷产孢培养基平板表面菌落，使得菌落上的孢子释放到水中，将洗刷孢子的水液收集起来，即为含有大量新的稻曲病菌薄壁分生孢子的培养产物；5)薄壁分生孢子纯化处理：将所收集的培养产物进行薄壁分生孢子纯化处理，纯化处理方法是，用2层纱布过滤去除培养产物中的菌丝；然后将过滤液进行离心处理并收集沉淀孢子；接着用无菌水将沉淀孢子悬浮洗涤，再进行一次离心处理，可获得非常纯净的薄壁分生孢子团，用无菌水将这孢子团悬浮分散均匀即成为稻曲病菌薄壁分生孢子液。