[发明专利]利用清洗一次性使用去白细胞塑料血袋获取白细胞的方法

摘要

本发明公开了一种利用清洗一次性使用去白细胞塑料血袋获取白细胞的方法，是使用灭菌冲洗液冲洗“一次性使用去白细胞塑料血袋”上的白细胞过滤装置及装置上方的三通，去除其上粘附的物质；再使用灭菌高渗液对其浸没静置处理；用灭菌冲洗液冲洗高渗液处理后的过滤装置，同时收集白细胞；用灭菌白细胞保护液重悬白细胞沉淀并培养细胞使白细胞恢复正常形状；然后分离收集获得存活白细胞。本发明方法操作简单，实验设备要求低，且白细胞收集率高，为珍贵的白细胞资源回收利用又提供了一条简便的途径。

主权项

一种利用清洗一次性使用去白细胞塑料血袋获取白细胞的方法，步骤是：（1）在百级洁净区内，使用灭菌冲洗液初步冲洗“一次性使用去白细胞塑料血袋”上的白细胞过滤装置，去除其上粘附的血渍；用注射器吸取冲洗液，插入到血袋过滤装置上方的三通中，冲洗2‑3次，去除其上粘附的物质；（2）在百级洁净区内，再使用灭菌高渗液冲洗过滤装置30s，然后用高渗液对其浸没静置处理1‑2min；（3）在百级洁净区内，用灭菌冲洗液冲洗高渗液处理后的过滤装置，同时将含脱落白细胞的冲洗液转移至无菌离心管中；（4）以1600转/分离心8‑15min，弃去上清液，收集白细胞；（5）在百级洁净区内，用灭菌白细胞保护液重悬白细胞沉淀并将细胞混悬液转移至无菌细胞培养瓶中，在37℃、5%CO2培养箱中培养细胞2‑3h，使白细胞恢复正常形状；（6）在百级洁净区内，将培养后的白细胞悬液转移至无菌离心管中，以1000转/分离心3‑5min，弃去上清液，沉淀即为收获的存活白细胞；其中：上述冲洗液配方是：PBS缓冲液、D‑Hank’s液、DPBS、0.9%NaCl水溶液、1640培养基溶液或其他淋巴细胞无血清培养基溶液；上述高渗液配方是：NaCl15.0g/L、白蛋白50.0ml/L、NaHCO3适量；渗透压为350～500mOsm/kg，pH值为7.35～7.45，使用NaHCO3调节pH；上述白细胞保护液配方是：每升1640培养基溶液中含有白蛋白10mg、AB血清60ml、胰岛素5mg、亚硒酸钠5mg、hepess20mM、L‑谷氨酰胺1mM、β‑巯基乙醇0.1mM；渗透压为300mOsm/kg，pH值为7.35～7.45。