[发明专利]牛布鲁氏菌间接ELISA检测试剂盒

摘要

本发明公开了一种牛布鲁氏菌间接ELISA检测试剂盒，由以下试剂构成：（1）预包被ELISA反应板，由包被液、包被抗原和封闭液构成，包被抗原为Virb8蛋白；（2）PBST洗涤液；（3）酶标二抗；（4）终止液；（5）显色液。本发明涉及的Virb8蛋白仅在布鲁氏菌感染的早期特异性表达，该蛋白对应产生的抗体处于感染早期，且产生的抗体存在时间较长，因此，克隆表达布鲁氏菌Virb8蛋白并建立相应的间接ELISA检测方法能够更特异、灵敏地判断是否存在布鲁氏菌感染和定量感染后引起的抗体滴度，可以为布鲁氏菌病的血清学早期诊断提供一种快速准确的方法，对解决大批量样品的布鲁氏菌现场检测技术具有重要的现实意义。

主权项

一种牛布鲁氏菌间接ELISA检测试剂盒，其特征在于：由以下试剂构成：（1）预包被ELISA反应板：数量为5块，由包被液、包被抗原和封闭液构成，其中，包被液中，Na2CO3的浓度为1.59g/L，2.93g NaHCO3的浓度为2.93g/L；包被抗原为Virb8蛋白，工作浓度为1.16μg/mL，工作条件为4℃包被过夜；封闭液为10%马血清；（2）25倍PBST洗涤液：体积为60ml，体积为1L的25倍PBST洗涤液制备方法为：将准确称量的200g NaCl、5.0g KCl、35.5g Na2HPO4和6.75g KH2PO4充分溶解在800mL去离子水中，然后将pH值调节到7.4，然后加去离子水定容至1L，再加入500μL Tween‑20，即得；（3）酶标二抗：体积为60μl，辣根过氧化物酶HRP标记兔抗牛IgG，工作浓度为1:1000，工作条件为：37℃孵育60min；（4）终止液：体积为60ml，2mol/L的硫酸溶液；（5）显色液：体积为60ml的TMB显色液。