[发明专利]高通量液相色谱法串联质谱法检测25羟基维生素D的方法

摘要

本发明实施例提供了一种高通量液相色谱法串联质谱法检测25羟基维生素D的方法，向人血清样品加入含有25羟基维生素D内标物的乙腈溶液进行蛋白沉淀；充分混匀后加入正己烷萃取溶剂；再充分混匀后离心，接着移取上清液并进行干燥后，加入复溶剂，得到待测样品；对待测样品用高通量液相色谱串联四级杆质谱仪进行检测；以25羟基维生素D₂和/或25羟基维生素D₃的相对保留时间和检测的定量离子对的丰度比为定性依据，采用内标标准曲线法定量。本发明实施例前处理简单，特异性、抗基质干扰能力强；检测时间短，通量高，检测精密度高，成本低廉。

主权项

1.一种高通量液相色谱串联质谱法检测25羟基维生素D的方法，其特征在于，包括：（1）、向人血清样品加入含有25羟基维生素D内标物的乙腈溶液进行蛋白沉淀；充分混匀后加入正己烷萃取溶剂；充分混匀后离心，接着移取上清液并进行干燥后，加入复溶剂，得到待测样品；其中，所述人血清样品与所述乙腈溶液、正己烷萃取溶液的体积比为1：2：4；所述上清液与对应的原溶液的体积比为1：2；所述复溶液与人血清样品的体积比为1:2；（2）、对所述待测样品用液相色谱串联四级杆质谱仪进行检测；所述检测采用正离子模式，扫描方式采用多反应监测离子扫描MRM；其中，目标定量离子对包括25羟基维生素D₂定量离子对，和25羟基维生素D₃定量离子对；目标定量离子的多反应监测离子扫描MRM的条件包括：25羟基维生素D₂的母离子的质/荷比为412.7～413.7，对应的子离子的质/荷比为394.8～395.8；25羟基维生素D₃的母离子的质/荷比为400.7～401.7，对应的子离子的质/荷比为382.9～383.9；其中，所述液相色谱采用梯度模式洗脱，液相色谱条件包括：色谱柱：2.7um2.1mm×50C18；色谱柱柱温：55℃；进样量：20ul；流速：0.9ml/min；流动相：含0.1%甲酸的甲醇，以及，含0.1%甲酸的水；25羟基维生素D₃的保留时间为2.60min，和/或，25羟基维生素D₂的保留时间为2.80min；（3）、依据25羟基维生素D₂和/或25羟基维生素D₃的相对保留时间，以及，25羟基维生素D₂定量离子对和/或25羟基维生素D₃定量离子对的丰度比，判断25羟基维生素D₂和/或25羟基维生素D₃的存在；依据25羟基维生素D₂和/或25羟基维生素D₃与对应内标物在内标标准曲线上的峰面积比值，计算人血清样品中的25羟基维生素D₂和/或25羟基维生素D₃的含量。