[发明专利]磁分离小肠结肠炎耶尔森氏菌YE的方法

摘要

本发明涉及生物技术领域，公开了富集分离小肠结肠炎耶尔森氏菌（Yersiniaenterocolitica,YE）的方法。方法包括树状分子与抗体共价偶联、抗体修饰的树状分子再包被长链生物素分子、抗体和长链生物素共修饰的树状分子捕获样品液中的目的菌、链霉亲和素修饰的纳米磁珠识别并偶联样品液中的长链生物素化树状分子、被捕获细菌的分离及重悬等步骤；重悬液可以直接进行后续分析，与传统的细菌磁分离方法相比，该方法更适用于在复杂基质中对细菌进行磁分离，提高了样品中目的菌分离效率。

主权项

磁分离小肠结肠炎耶尔森氏菌YE的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)每称取1.1 mg树状分子，悬浮于4 mL 0.01 mol/L，pH 8.0 PBS磷酸缓冲液中，搅拌滴加25%的戊二醛水溶液545 μL，使戊二醛的终浓度为3%，在摇床150 r/min的转速下室温反应3.5 h；向上述溶液添加小肠结肠炎耶尔森氏菌YE特异性抗体12 mg，使其终浓度达到 3 mg/mL左右；摇床150 r/min的转速下室温反应24 h；减压旋干溶剂，去离子水溶解，在PBS和去离子水中透析1 d；透析结束将得到的溶液冷冻干燥，得到树状分子‑抗体复合物；(2)每取15 mg长链生物素，悬浮于4 mL 0.01 mol/L，pH 8.0 PBS磷酸缓冲液中，搅拌滴加25%的戊二醛水溶液545 μL，使戊二醛的终浓度为3%；在摇床150 r/min的转速下室温反应3.5 h；将0.55 mg步骤（1）所得树状分子‑抗体复合物加入到上述溶液中，在摇床150 r/min的转速下室温反应24 h；减压旋干溶剂，去离子水溶解，在PBS和去离子水中透析1 d；透析结束将得到的溶液冷冻干燥得到长链生物素‑树状分子‑抗体复合物；(3)取待测样品溶液1 mL，加入0.1 mg长链生物素‑树状分子‑抗体复合物，置于混匀仪上，以30 rpm的转速室温孵育15 min形成长链生物素‑树状分子‑抗体‑YE抗原复合物；加入0.1 mg修饰有链霉亲和素的纳米磁珠，置于混匀仪上，以30 rpm的转速室温孵育15 min，将离心管插入常规磁力架分离3 min；(4)磁分离后，去离子水轻轻清洗后，用PBS缓冲液重悬即得富集有YE的复合物纳米磁珠‑链霉亲和素‑生物素‑树状分子‑抗体‑YE复合物。