[发明专利]一种生产犏牛可控性别体外胚胎的方法

摘要

本发明公开了一种生产犏牛可控性别体外胚胎的方法，包括以下步骤：将牦牛卵巢去除周围结缔组织并清洗后，选取卵母细胞并洗涤；将洗涤后的卵母细胞转入添加有血清、激素、卵泡液和Hepes缓冲液的培养皿中，再将培养皿放入培养箱中进行成熟培养；取普通牛的含X或Y染色体的精子，通过Percoll梯度分离液将精液中的死精子与活精子分开；将培养成熟的卵母细胞从Hepes缓冲液中拣出，用受精液洗涤后将含X或Y染色体的精子加入到含有卵母细胞的受精微滴中，放入培养箱中进行体外受精培养；受精后进行囊胚成熟处理；成熟时回收囊胚，进行胚胎移植或贮存。通过本发明与其他多种现代胚胎生产技术相结合能进行性控犏牛的繁育，迅速增加优质犏牛的数量。

主权项

一种生产犏牛可控性别体外胚胎的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）将牦牛卵巢去除周围结缔组织后，用无菌生理盐水冲洗3～4次，从清洗干净的牦牛卵巢表面抽取卵母细胞，将卵母细胞置于收集液中，在体视显微镜下选取卵母细胞，将选取后的卵母细胞用收集液洗涤2～3次，再用成熟培养液洗涤1次；（2）将洗涤后的卵母细胞转入添加有血清、激素、卵泡液和Hepes缓冲液的培养皿中，再将培养皿放入培养箱中进行成熟培养；（3）取由流式细胞仪分离的新鲜的普通牛的含X或Y染色体的精子或37℃解冻的普通牛的含X或Y染色体的精子，通过Percoll梯度分离液将精液中的死精子与活精子分开；（4）将步骤（2）中培养成熟的卵母细胞从Hepes缓冲液中拣出，用受精液洗涤2次后转入用受精液制成的受精微滴中，精子稀释后将含X或Y染色体的精子加入到含有卵母细胞的受精微滴中，放入培养箱中进行体外受精培养；（5）体外受精培养至受精后进行囊胚成熟处理；（6）在受精后第6、第7和第8天待囊胚成熟时回收囊胚，如有合适的受体牛，则进行胚胎移植；否则将发育良好的优质性控胚胎进行冷冻保存处理，然后置于液氮罐中贮存，供以后胚胎移植用。