[发明专利]一种携带PTD的抗人CD3单链抗体的制备方法

摘要

本发明公开了一种携带PTD的抗人CD3单链抗体（简称PTD-CD3）复性与纯化的制备方法。首先将形成PTD-CD3单链抗体包涵体溶解在脲溶液中，采用硅胶基质高效疏水相互作用色谱（HPHIC）柱或色谱饼进行PTD-CD3单链抗体复性并同时纯化。对该方法色谱条件优化和HPSEC除盐获得质量回收率为46%，纯度为96%的PTD-CD3单链抗体，竞争结合抑制作用证实PTD-CD3具有天然CD3单链抗体的生物活性。

主权项

1.一种携带PTD的抗人CD3单链抗体的制备方法，包括以下步骤：（1）天然抗CD3抗体基因与肽段-PTD基因融合得到携带PTD抗CD3单链抗体基因，将携带PTD抗CD3单链抗体基因插入E.coli表达载体pBV220表达，获得携带PTD的抗人CD3单链抗体重组菌；（2）PTD-CD3单链抗体重组菌在E.coli中的表达产物为含PTD-CD3的包涵体，将包涵体溶解于6.0～8.0 mol/L脲溶液，使用结构式（I）或（II）所示的高效疏水色谱介质进行复性与纯化，收集色谱馏分，得到复性与纯化的PTD-CD3；（I）其中n=10～25（II）空白基质为孔径为20-30 nm，粒径为5-10μm的大孔硅胶微球；色谱条件：流动相A液为2～3 mol/L (NH₄)₂SO₄，20～50 mmol/L KH₂PO₄，pH 7～8；流动相B液为20～50 mmol/L KH₂PO₄，pH 7～8；流速为1.0～5.0 mL/min；采用0-100% B液线性梯度洗脱，检测波长280 nm；（3）将PTD-CD3单链抗体用体积排阻色谱除盐进一步纯化。