[发明专利]体外慢病毒介导BMP-2基因诱导滑膜间充质干细胞向软骨细胞分化的方法

摘要

本发明一种体外慢病毒介导BMP-2基因诱导滑膜间充质干细胞向软骨细胞分化的方法，包括一个将滑膜间充质干细胞分离和培养的步骤，一个构建重组质粒pFUGW-oBMP-2的步骤，一个制备转染慢病毒病毒液的步骤，一个利用转染慢病毒病毒液转染滑膜间充质干细胞的步骤，在制备转染慢病毒病毒液的步骤中，利用重组质粒pFUGW-oBMP-2和包装质粒共同构成转染慢病毒，在利用转染慢病毒病毒液转染滑膜间充质干细胞的步骤中，取第三代以上的滑膜间充质干细胞，和转染慢病毒的病毒液混合，然后加入不完全成软骨细胞诱导培养液中诱导后得到软骨细胞。本发明证明经转染慢病毒转染的SMSCs足够安全，在体外可自发向软骨分化。

主权项

一种体外慢病毒介导BMP‑2基因诱导滑膜间充质干细胞向软骨细胞分化的方法，包括一个将滑膜间充质干细胞分离、培养的步骤；其特征在于：还包括一个构建重组质粒pFUGW‑oBMP‑2的步骤，一个制备转染慢病毒的病毒液的步骤，一个将转染慢病毒转染滑膜间充质干细胞的步骤，在所述的构建重组质粒pFUGW‑oBMP‑2的步骤中，首先根据BMP‑2基因设计引物，通过逆转录反应扩增BMP‑2基因，将已经包含EGFP报告基因的pFUGW质粒和BMP‑2基因重组，构建重组质粒pFUGW‑oBMP‑2，在所述的制备转染慢病毒的病毒液的步骤中，利用所述的重组质粒pFUGW‑oBMP‑2加上包装质粒，共同构建转染慢病毒，然后再加入缓冲液培养、孵育、移去上清、过滤后得到转染慢病毒的病毒液，在所述的将转染慢病毒转染滑膜间充质干细胞的步骤中，取第三代以上的滑膜间充质干细胞和解冻的转染慢病毒的病毒液混合，将混合物离心、培养40‑52小时，然后将上述的培养物加入不完全成软骨诱导培养液诱导培养液中诱导，诱导14天以上即可获得软骨细胞。