[发明专利]从胎盘和脐带中同时提取和纯化多种来源干细胞的方法

摘要

本发明涉及一种从胎盘和脐带中同时提取和纯化包括脐带血造血干细胞、胎盘血造血干细胞、胎盘羊膜、羊水、绒毛膜干细胞和来自于胎盘和脐带组织间的间充质干细胞在内的多种来源干细胞的方法。该方法是以采血器材收集羊水，脐带血，然后用机械的步骤收集胎盘血，最后采用机械、联合酶消化和单克隆抗体-磁珠法从羊水及胎盘羊膜，绒毛膜上皮干细胞以及胎盘组织中提取、浓缩和纯化活性好、浓度高、数量多的上皮和间充质干细胞。并将这些干细胞分别做各种检测，浓缩，纯化和保存，建立联合干细胞库，可用于造血干细胞移植和细胞治疗。

主权项

一种从胎盘和脐带中同时提取和纯化多种来源干细胞的方法，其特征在于，所述方法包括使用采血器材收集脐带血，然后以机械的方式收集胎盘血，最后采用机械、酶消化和单克隆抗体‑磁珠法从胎膜及胎盘组织中提取的干细胞的方法，具体包括如下步骤：首先从健康产妇的一个胎盘和脐带中同时提取和储存多种来源的干细胞，所述干细胞包括脐带血造血干细胞、胎盘血造血干细胞、羊水、胎盘羊膜及绒毛膜上皮干细胞和来自于胎盘组织的间充质干细胞；其中，每个胎盘的脐带血可以提取平均为1.50X109细胞、胎盘血平均可提取3.8X109个细胞、羊水中可以提取平均为3.0X108、胎盘羊膜以及绒毛膜上皮干细胞2.0X108胎盘组织间充质干细胞为3.5X109有核细胞、细胞活性为95％以上，多种来源的造血干细胞其CD34阳性标记细胞总数为2.5X108，微生物污染率低于5％以下；将上述来源的干细胞建立联合干细胞库；将联合干细胞库备案并组织配型(HLA)以符合临床的要求；所述干细胞还可以是从脐带静脉注入抗凝剂、抗生素，以输液泵连续循环的方式从脐带动脉处收集的胎盘血造血干细胞；所述干细胞还可以是将羊水和剥离胎膜或胎盘以挤压、剪碎、研磨或离心的机械方式或酶消化的方法收集且被清洗的组织间充质干细胞，再用单克隆抗体磁珠法纯化该间充质干细胞，之后将纯化后的间充质干细胞在体外培养成如皮肤、粘膜、神经、肾、肝、胰岛定 向的组织细胞；将上述干细胞临床分别做各种检测，浓缩，纯化存放于保持无菌以及控制温度在0℃到4℃之间的收集箱内；将备用干细胞储存在深低温状态。