[发明专利]氨肽酶及其高产菌的高通量筛选方法无效
| 申请号： | 201210543221.4 | 申请日： | 2012-12-14 |
| 公开（公告）号： | CN102994387A | 公开（公告）日： | 2013-03-27 |
| 发明（设计）人： | 姜文侠;杨玉兰;刘琦;杨萍;陈宁 | 申请（专利权）人： | 天津工业生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12N1/02 | 分类号： | C12N1/02;C12Q1/37;C12Q1/04;G01N21/64;G01N21/31 |
| 代理公司： | 北京鼎佳达知识产权代理事务所(普通合伙) 11348 | 代理人： | 王伟锋;刘铁生 |
| 地址： | 300308 天津市*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明公开了氨肽酶及其高产菌的高通量筛选方法，涉及一种氨肽酶及其高产微生物菌株的高通量筛选方法。将单菌落接种于装有液体种子培养基的深孔板I的孔中，摇床培养，将深孔板I深孔中的种子液对应地接种到装有发酵培养基的深孔板II对应的深孔中，摇床培养，将深孔板II离心，上清液为粗酶液。在酶标板的微孔中加入缓冲液和显色底物溶液或荧光底物溶液，再加入稀释的待测粗酶液，于30～70℃水浴反应10～30min，反应结束时立即加入30～50％乙酸溶液并终止反应。采用酶标仪测定反应液的吸光度或荧光强度，根据标准曲线和粗酶液的稀释倍数计算酶活。本发明实现了高通量培养、粗酶液的高通量制备及酶活的高通量测定的目标。 | ||
| 搜索关键词： | 氨肽酶 及其 高产 通量 筛选 方法 | ||
【主权项】：
氨肽酶及其高产菌的高通量筛选方法，包括如下步骤：挑取氨肽酶产生菌的单菌落，接种于装有液体种子培养基的深孔板I的孔中，盖上深孔板的盖子，于30～40℃、180～300rpm摇床培养4～10h；将深孔板I中的种子液对应地接种到装有发酵培养基的深孔板II中，于30～40℃、180～300rpm摇床培养16～48h；将深孔板II放置于孔板离心机，5000～10000×g离心5～30min；深孔板II的深孔中的上清液为粗酶液；以微量化梯度稀释法将粗酶液适当稀释；用酶标板法测定粗酶液的酶活，在酶标板的微孔中加入缓冲液和显色底物溶液或荧光底物溶液，加入稀释的待测粗酶液，以蒸馏水作空白对照，于30～70℃水浴反应10～30min，反应结束立即加入30～50%乙酸溶液终止反应；采用酶标仪测定反应液的吸光度或荧光强度，根据标准曲线和粗酶液的稀释倍数计算酶活；根据酶活测定结果，选择对应的菌株进行摇瓶复筛，获得氨肽酶高产菌株。
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