[发明专利]一种植物乳酸杆菌培养物的制备方法

摘要

本发明公开了一种植物乳酸杆菌培养物的制备方法，采用植物乳酸杆菌作为发酵菌种，在优化的固体培养基中，在温度为37℃的条件下培养，经过三级放大而进行大规模发酵生产，经过聚乙二醇PEG4000和聚丙烯酸钠处理之后，制成活性稳定的植物乳酸杆菌制剂。本发明有益效果：本发明提供一种植物乳酸杆菌培养物的制备方法，经此方法制备的植物乳酸杆菌，耐酸和耐胆盐能力更强，且能在营养不均的恶劣环境下生存，进入动物肠道存活率更高，定植能力更强，故将其作为饲料添加剂添加到饲料中，能够促进饲料中营养成分的吸收，改善肠道环境，提高机体免疫力和抗病能力。

主权项

一种植物乳酸杆菌培养物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）菌种活化：将‑80℃保存的菌种在固体种子培养基固体平板上划线，在温度为37℃的条件下培养16个小时左右，使菌种活化，所述菌种为植物乳酸杆菌；（2）制备一级种子：将活化的植物乳酸杆菌，用接种环挑取一环接种于300 mL 液体种子培养基中，将三角瓶置于摇床中，在温度为37℃和转数为250rpm的条件下，振荡培养16~20小时后，制得一级种子菌；（3）配制固体发酵培养基：将固体干基加入质量比为1:1~2的无菌水，并在pH值为6.5的条件下，搅拌均匀，将固体培养基在温度为121℃的条件下，高温高压灭菌20min，待冷却后即可作为固体发酵培养基使用；（4）固体发酵：将经过灭菌处理的固体发酵培养基按照10%的接种量接入一级种子菌，搅拌均匀，保持湿度为50~70%和温度为35~37℃的条件下，培养16~20个小时，制得二级种子；（5）将得到的二级种子，按照步骤（4）进一步固体发酵得到三级种子；（6）可以根据具体的培养用量，进一步将三级种子按照步骤（4）进一步固体发酵扩大培养；（7）将植物乳酸杆菌培养物进行菌落计数，要求活菌体浓度可达8.0×109 CFU/g 鲜曲以上；（8）将烘干的植物乳酸杆菌固体发酵培养物，加入质量比为0.2% 的聚丙烯酸钠和5% 的PEG4000（预先溶解于水），搅拌混匀，干燥制得成品。