[发明专利]狂犬疫苗糖蛋白含量的检测方法

摘要

本发明涉及一种狂犬疫苗糖蛋白含量的检测方法，其特点是采用ELISA夹心法检测狂犬病毒抗原含量，首先在96孔酶标板上包被狂犬病毒多克隆抗体。加入待检测样品，37℃孵育1.5小时；清洗酶标板5次；后加入鼠抗狂犬病毒单克隆抗体。37℃孵育1.5小时；清洗酶标板5次，加抗小鼠的酶结合物。37℃孵育1小时；清洗酶标板6次.加底物显色后。酶标仪检测，读取OD值。计算样品的狂犬病毒糖蛋白含量。本发明可用于狂犬疫苗产业中的质量控制，并能够快速鉴别狂犬疫苗真伪。

主权项

一种种狂犬疫苗糖蛋白含量的检测方法，其特征在于有以下步骤：(1)将人抗狂犬病毒免疫球蛋白适宜稀释度配制成包被液，每孔加包被液200μl，用封口膜封好，置于湿盒中37℃至少3小时，然后4℃过夜，取出倒空板，加300μl/孔封闭液，再用封口膜封好置于湿盒中37℃至少1小时，最后倒空板，用封口膜封好，置于‑70℃保存；(2)每个样品以2倍法稀释多个稀释度(当糖蛋白含量较高时可增大稀释度)，参考疫苗：以2倍法稀释8个稀释度，将预先包被好的酶标板从‑70℃冰箱中取出，用洗板机清洗至少4次，洗液300μl/孔，倒空板，加样200μl/孔，第1列加稀释液作为空白，不加样品；第2列加参考疫苗，由低稀释度往高稀释度加，第4～12列为样品，加入不同样品时应更换枪头，将加完样的酶标板用封口膜封好，置于37±℃湿盒中孵育至少90min；(3)将板取出，用洗板机清洗至少5次，洗液300μl/孔，将适宜稀释度的小鼠抗狂犬病毒单克隆抗体25ml，用多道加样枪加到酶标板上，200μl/孔，然后封口膜封好，置于37℃湿盒中孵育至少90min；(4)将板取出，用洗板机清洗至少5次，洗液300μl/孔，将适宜稀释度的辣根酶标记山羊抗小鼠过氧化物25ml，用多道加样枪加到酶标板上，200μl/孔，然后封口膜封好，置于37℃湿盒中孵育至少60min；(5)将板取出，用洗板机清洗至少6次，洗液300μl/孔。加现配制好的显色液，200μl/孔，室温下避光反应至少30min，同时打开酶标仪预热，加50μl/孔4.5mol/L H₂SO₄终止反应，使用酶标仪，设定相应的空白，并在492nm测定；(6)结果计算：将所有测定的OD值，逐一输入计算模板中，按照参考疫苗糖蛋白含量和所对应的OD值做一次回归方程Y＝aX+b，将同一样品不同稀释倍数下所对应的OD值代入方程，计算各稀释度的糖蛋白含量，并乘以相对应的稀释倍数，得到多个结果后，选择结果相近数值的平均数作为检验的最终结果。