[发明专利]一种改良密度梯度离心法测定花粉密度的方法

摘要

本发明公开了一种改良密度梯度离心法测定花粉密度的方法。首先将蔗糖溶于水中，配制成不同质量百分比的浓度梯度溶液，然后将待测花粉混入10%的蔗糖溶液中，注入离心管底。接着采用层铺法配制20~70%的蔗糖密度梯度离心液。在20℃下，以4000~10000rpm速度，离心5~15min，待花粉达到沉降平衡后静置，取花粉悬浮所在层相应浓度的蔗糖溶液，绘制待测花粉在该相应浓度蔗糖溶液中的吸光度标准曲线，以该曲线为参照，采用分光光度计在290nm波长下，测定花粉悬浮所在层蔗糖溶液的吸光度值，根据下列公式计算花粉密度：本发明适用于各种花粉密度的测定，结果准确，重复性好，操作简便、易行，需样品量少。

主权项

1.一种改良密度梯度离心法测定花粉密度的方法，包括蔗糖浓度梯度溶液配制、花粉样品处理、花粉样品铺放、密度梯度离心液配制、离心沉降、绘制吸光度标准曲线、测定吸光度及花粉密度计算，具体包括：A、蔗糖浓度梯度溶液配制：将蔗糖溶于水中，配制成质量百分比分别为20~70%的溶液；B、花粉样品处理：将蔗糖溶于水中，配置成质量百分比为10%的溶液，称取0.001~0.01g待测花粉混合在100~1000μl 10%蔗糖溶液中；C、花粉样品铺放：将含有花粉样品的10%蔗糖溶液注入离心管底部；D、密度梯度离心液配制：采用层铺法将质量百分比20~70%的蔗糖溶液依次注入，已含有待测花粉样品的10%蔗糖溶液的离心管底部，配置成密度梯度离心液；E、离心沉降：在离心机中，20℃下，以4000~10000rpm速度，对含待测花粉样品的密度梯度离心液离心5~15min，待花粉达到沉降平衡后静置；F、绘制吸光度标准曲线：选取花粉悬浮所在层相应浓度的蔗糖溶液，绘制待测花粉在该相应浓度的蔗糖溶液中的吸光度标准曲线；G、测定吸光度值：取花粉沉降平衡后的密度梯度离心液，采用分光光度计在290 nm波长下，测定待测花粉悬浮层蔗糖溶液的吸光度值，利用标准曲线换算成该层浓度梯度下花粉的浓度值；H：花粉密度计算：花粉的密度按照下列公式计算：其中：ρ——花粉的密度；OD_n——第n层蔗糖梯度溶液中花粉浓度值；OD——所有含花粉的各蔗糖梯度溶液中花粉浓度值总和；ρ_n——第n梯度蔗糖溶液密度。