[发明专利]一种利用高能碰撞诱导电离碎裂技术鉴定蛋白的方法

摘要

本发明公开了一种利用高能碰撞碎裂技术（high collision induced dissociation）鉴定蛋白的方法。本发明提供了一种利用高能碰撞碎裂技术鉴定未知目的蛋白的方法，包括主要步骤如下：用搜索引擎对获得的二级HCD质谱图进行候选肽段搜索并生成理论谱；再匹配所述实验谱与所述理论谱，输出鉴定结果；所述生成理论谱为同时进行生成理论b离子单一同位素峰质荷比、生成理论y离子单一同位素峰质荷比和对y离子增加第一同位素峰离子的质荷比。本发明的方法简单有效，可在不更改数据库搜索引擎数据结构和匹配打分算法下显著提升肽段鉴定灵敏度。

主权项

一种利用高能碰撞碎裂鉴定待测蛋白的方法，包括如下步骤：1）将待测蛋白酶解得到肽段；2）将所述肽段经液相色谱质谱串联检测，得到二级HCD质谱图，记作实验谱；所述液相色谱质谱串联中的中的二级质谱产生模式采用高能碰撞碎裂；3）将所述二级HCD质谱图转换成数据库搜索引擎可读格式；4）用搜索引擎先对经过3）处理的二级HCD质谱图进行候选肽段搜索并生成理论谱；再匹配所述实验谱与所述理论谱，输出鉴定结果；所述生成理论谱为同时进行生成理论b离子单一同位素峰质荷比、生成理论y离子单一同位素峰质荷比和对y离子增加第一同位素峰离子的质荷比；将所述生成理论y离子的单一同位素峰质荷比记作m/zyi，所述对y离子增加其第一同位素峰离子的质荷比记作m/zyi’，且m/zyi’=m/zyi+1.003355/z，yi代表候选肽段从C端开始数第i个肽键位置断裂后形成的y离子；yi'表示代表候选肽段从C端开始数第i个肽键位置断裂后形成的y离子的第一同位素峰，其中i=1,2,3,...L‑1；L为候选肽段的长度；5）将所述鉴定结果进行质量控制和错误发现率计算，得到待测蛋白中肽段的序列和数目，实现鉴定待测蛋白。