[发明专利]毛葡萄离体快速繁殖培养方法

摘要

本发明公开了一种毛葡萄离体快速繁殖培养方法，包括以下步骤，无菌系的建立、不定芽诱导、生根培养及炼苗移栽。本发明采用植物组织培养技术成功实现毛葡萄离体快速繁殖，使毛葡萄无菌单芽茎段腋芽增殖率达97%以上，繁殖系数达17.0-20.2，生根率达93%以上，炼苗成活率可达100%，解决毛葡萄种苗繁殖率低下的问题，为生产提供大量的优质毛葡萄种苗；本发明方法简单，成本低廉，使用效果好，产业化应用前景广阔。

主权项

一种毛葡萄离体快速繁殖培养方法，其特征在于：包括以下步骤，步骤一、无菌系的建立：在生长季节选取生长健壮的毛葡萄新梢作为外植体，用自来水冲洗干净，在超净工作台上，先用体积百分比为70%的酒精漂洗30s，再用无菌水冲洗3次后，用质量百分比为0.1%的升汞溶液浸泡消毒8‑10min后，用无菌水冲洗5‑6次，然后剪除新梢两端褐化部分后，剪成单芽茎段，接种到MS培养基中，在温度为25±1℃，光照强度为40umol·s‑1·m‑2，光照时间为12h/d的培养条件下，培养诱导至腋芽萌发，获得腋芽萌发产生的带芽茎段；步骤二、腋芽增殖：取步骤一中获得的腋芽萌发产生的带芽茎段剪成单芽茎段，芽眼向上接种到MS培养基上，在温度为25±1℃，光照强度为40umol·s‑1·m‑2，光照时间为12h/d的条件下培养30d，腋芽增殖产生大量丛生不定芽；步骤三、生根培养：取步骤二中产生的不定芽，将其接种到1/2MS生根培养基中，先光下培养7d，再暗培养7d后，然后转入光下继续培养至正常生根，获得试管苗；培养温度为25±1℃，光照强度为40umol·s‑1·m‑2，光照时间为12h/d；步骤四、炼苗移栽：选取步骤三中生有3‑4条根，长为4‑5cm的试管苗，在102.8umol·s‑1·m‑2的光照条件下炼苗7d，然后从培养瓶中取出试管苗，洗净试管苗根部培养基，用质量百分比为0.1% KMnO4溶液浸根10s，再移栽到灭菌的珍珠岩基质中，用1/8MS营养液浇透，之后每隔7d浇灌1次营养液，并从移栽后第2‑3d始每隔7d浇灌1次1000倍质量百分比为40%的多菌灵溶液，加盖与营养钵相同大小的塑料杯保持湿度，置于温度为25±1℃的培养室内培养至植株长出3‑5条新根后移栽到盛有营养土的营养钵中，置于温室内炼苗30d，最后定植到大田即可。