[发明专利]一种高纯度蛋黄卵磷脂的制备方法

摘要

本发明提供一种高纯度蛋黄卵磷脂的制备方法，涉及食品、药品配料生产领域。将新鲜鸡蛋经拣蛋、洗蛋、消毒处理后，进行蛋清和蛋黄的分离，得到蛋黄液；经一定量纯水稀释后加入到超声波提取罐中，以80%～95%乙醇为溶剂，采用脉冲超声波进行1～5次重复浸提，后经浓缩干燥制备得到PC粗提物；之后将PC粗提物置入亚临界萃取釜中，以液化丙烷或丁烷为溶媒，进行1～5次亚临界逆流浸提，萃取时间10～120min，料液比1:1～6，萃取温度10～90℃，萃取压力0.2～1.0MPa，之后进行减压脱溶，得到无油PC复合物；最后采用磁性纳米颗粒进一步精制，获得高纯度蛋黄PC。采用上述方法制备得到的蛋黄PC不仅得率大大提高，纯度也高达98%以上。

主权项

一种高纯度蛋黄卵磷脂的制备方法，其特征在于按照下述步骤进行：（1）蛋黄、蛋清分离：首先对新鲜鸡蛋检查消毒，破壳后将蛋黄、蛋清分离，蛋黄搅拌均匀后，得到新鲜蛋黄液；其中消毒条件为95～100 ℃的沸水中，浸泡5～7 s；（2）中性脂质的提取：将新鲜蛋黄液与水按重量比1:1～1:3稀释并搅拌均匀后加入到超声波提取罐中，并向提取罐中加入1～9倍体积的质量分数为80～95%乙醇溶液，随后采用脉冲超声波进行辅助提取，提取0.1～1 h后将混合物经离心或过滤分离，反复提取1～5次，合并醇提取液即为蛋黄中性脂质提取液，其中脉冲超声波频率20～200 KHz，提取温度20～70 ℃，提取时间10～60 min，脉冲间隔1～5 s； （3）浓缩，干燥：将（2）中所得的蛋黄中性脂质提取液于40～50 ℃下减压浓缩至稠膏状，回收溶剂，将所得稠膏状物于50～65 ℃下真空干燥，即得浅黄色蛋黄卵磷脂粗提物；（4）亚临界流体脱除蛋黄油：将经步骤（3）获得的蛋黄卵磷脂粗提物装入萃取釜，将萃取釜抽真空，利用压力差将溶剂罐内亚临界丙烷或亚临界丁烷注入萃取釜内进行搅拌式逆流浸提，整个萃取过程在完全封闭的工艺条件下完成；其中萃取条件为：浸提次数1～5次，料液比1:1～1:6，萃取时间10～120 min，搅拌速度35～100 r/min，萃取温度10～90 ℃，其中优选40～60 ℃，压力0.2～1.0 Mpa；经脱除蛋黄油后的卵磷脂记作蛋黄卵磷脂复合物；（5）蛋黄卵磷脂复合物脱溶：首先采用蒸汽或热水对萃取釜进行加热，并搅拌，加热温度10～110 ℃，搅拌速度30～100 r/min，待萃取釜压力降到0.01 MPa，启用真空泵进行负压蒸发，直至压力降至–0.09 MPa以下；打开萃取釜，排出低温脱油蛋黄卵磷脂；气化后的丁烷经压缩、冷凝液化后，回到溶剂储罐中循环使用； （6）磁性纳米载体的制备：采用化学共沉淀法：将可溶性的七水硫酸亚铁和六水氯化铁溶解于水溶液中，二者摩尔比为1:2～2:1，总铁离子浓度为0.01～0.5 mol/L；机械搅拌转数为200～800 r/min；然后加入聚乙二醇6000，其中加入量为总铁质量的1/10；控制温度为40～70 ℃，除氧30 min；之后在机械搅拌状态下，快速加入质量浓度为25%氨水或氢氧化钠碱溶液，使反应溶液的pH >10，搅拌反应10 min后在剧烈搅拌状态下缓慢加入质量浓度为5 %的羧甲基壳聚糖溶液，CM‑CTS溶液的加入量为总反应溶液体积的1/10，加样完毕后将温度迅速升高到70～90 ℃反应30～120 min；反应结束后，在外加磁场的作用下快速分离出磁性颗粒，用去离子水清洗数次以去除未反应完全的化学物质，直至最后溶液的pH在7左右；最后收集黑色的磁性羧甲基壳聚糖纳米颗粒，并进行冷冻干燥处理;然后采用Ca2+对磁性羧甲基壳聚糖纳米颗粒表面进一步修饰，工艺条件如下：1 mg/mL 磁性羧甲基壳聚糖纳米颗粒分别与2 mg/mL的Ca2+溶液混合，调节混合溶液的pH值到5.0～8.0，并于200～800 r/min的持续搅拌状态下，于25～50 ℃的恒温条件下动态吸附30～120 min，使其达到吸附平衡，制备得到Ca2+修饰的固定化金属离子亲和磁性纳米颗粒，其中提供Ca2+的可能是氯化钙、碳酸钙、磷酸钙、草酸钙、醋酸钙中的一种或者两种的组合；（7）PC分离纯化：采用质量分数为80～95%乙醇溶液溶解步骤（5）所得的脱溶蛋黄磷脂复合物，之后加入Ca2+修饰的固定化金属离子亲和磁性纳米颗粒，在0～37 ℃搅拌反应10～180 min，使溶液中的PE特定地吸附在Ca2+修饰的固定化金属离子亲和磁性纳米颗粒表面，在外加磁场的作用下将吸附有PE的磁性纳米颗粒从反应溶液中分离出来，收集吸附液，采用高效液相色谱一蒸发光散射测定法测定PC含量和纯度；（8） PC脱色：对高纯蛋黄卵磷脂进行中性活性炭脱色处理，脱色温度 25～45 ℃、加样量 2.0～5.0%、脱色时间为30～90 min。