[发明专利]一种两维短梯度高效蛋白质组分离鉴定方法有效
| 申请号： | 201210210614.3 | 申请日： | 2012-06-20 |
| 公开（公告）号： | CN103512997A | 公开（公告）日： | 2014-01-15 |
| 发明（设计）人： | 秦钧;钱小红;丁琛;应万涛;张养军;卫军营;宋雷;江静;张姣;贺福初 | 申请（专利权）人： | 北京蛋白质组研究中心 |
| 主分类号： | G01N30/89 | 分类号： | G01N30/89 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅;王慧凤 |
| 地址： | 102206 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种两维短梯度高效蛋白质组分离鉴定技术。本发明的蛋白质组分离鉴定方法，包括以下步骤：1）从离体的细胞或组织中提取蛋白质混合物；2）采用蛋白酶将待分离鉴定的蛋白质混合物酶切成肽段混合物；3）将酶切获得的肽段混合物进行高温高pH短梯度反相色谱分离，反相色谱采用的柱温为30℃-80℃，采用流动相pH为7-12，有效梯度时间仅为26分钟；收集馏分，并对馏分进行干燥浓缩；4）将步骤3）获得的干燥浓缩样本复溶后，采用低pH短梯度反相色谱-质谱联用技术进行鉴定，反相色谱采用的流动相的pH值为2-5，有效梯度时间仅为30分钟。本发明的方法在6-24小时内，假阳性率低于1％条件下，实现对6000-9000个蛋白质的分析鉴定。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 两维短 梯度 高效 蛋白质 组分 鉴定 方法 | ||
【主权项】：
一种蛋白质组分离鉴定方法，其特征包括以下步骤：1）从离体的细胞或组织中提取蛋白质混合物；2）采用蛋白酶将待分离鉴定的蛋白质混合物酶切成肽段混合物；3）将酶切获得的肽段混合物进行高温高pH短梯度反相色谱分离，收集馏分，并对馏分进行干燥浓缩；4）将步骤3）获得的干燥浓缩样本复溶后，采用低pH短梯度反相色谱‑质谱联用方法进行鉴定。
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