[发明专利]布鲁氏菌病A19分子标记疫苗株的构建及毒力和免疫原性的测定

摘要

本发明涉及一种布鲁氏菌病A19分子标记疫苗株的构建及毒力和免疫原性的测定，本发明利用重组自杀质粒介导的同源重组技术敲除了布鲁氏菌病A19疫苗株中布鲁氏菌四型分泌系统中的一个毒力因子VirB12基因，得到A19-ΔVirB12的分子标记疫苗株。经动物实验结果表明，A19分子标记疫苗株毒力稍弱于亲本A19疫苗株，使菌株的安全性进一步提高，但仍保留了对布鲁氏菌病良好的免疫效果，而且该分子标记疫苗株具有稳定的遗传性。本发明以布鲁氏菌VirB12基因作为分子标记，应用PCR方法能鉴别布鲁氏菌疫苗菌株与野毒菌株，为建立区分疫苗免疫和自然感染的鉴别方法提供了分子标记，提升了原有的布鲁氏菌病A19疫苗功能，对控制牛布鲁氏菌病流行具有重要的实际意义，应用前景广阔。

主权项

一种布鲁氏菌病A19分子标记疫苗株的构建，其特征在于按下列步骤进行：a、为敲除布鲁氏菌A19菌株的VirB12基因，从布鲁氏菌A19疫苗株基因组中分别扩增出VirB12基因上游同源臂片段和下游同源臂片段；b、再将扩增出VirB12基因上游同源臂片段和下游同源臂片段经中间载体pGEM‑T将其克隆至自杀性质粒pBK‑CMV‑S载体上，从而构建敲除VirB12基因的重组自杀质粒pBCSV12；c、将重组自杀质粒pBCSV12电击到A19感受态细胞里，运用同源重组技术原理筛选同源重组双交换子，得到敲除VirB12基因的布鲁氏菌病A19分子标记疫苗株。