[发明专利]一种人工培养长座虫草子实体的方法

摘要

本发明涉及一种人工培养长座虫草子实体的方法。所用菌种为长座虫草无性型-长座被毛孢（Hirsutella longissima），其具体培养步骤如下：A.斜面试管菌种活化培养；B.液体摇瓶种子培养；C.菌丝阶段培养；D.子实体培养。人工培养的长座虫草子实体子座棒状，单生或分枝，肉桂色，长度1～7cm，直径1～3mm，子实体培养后期在子座顶端或侧面会生出大量白色孢梗束，致密。本发明为首创，利用该方法可以大规模地进行长座虫草子实体的培养，不仅解决了野生长座虫草资源的匮乏，而且为将来长座虫草药食用价值的综合开发和工厂化生产奠定基础和提供技术保障。本发明生产工艺简单、成本低、原料来源广泛、无毒、无污染，可大规模生产。

主权项

一种人工培养长座虫草子实体的方法，其特征在于：所用长座被毛孢（Hirsutella longissima）菌株，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号CGMCC No.5826；具体培养操作步骤如下：A、斜面试管菌种活化培养将长座被毛孢（Hirsutella longissima）菌种点接于斜面试管培养基， 温度25℃培养10～15d，得到斜面菌种；斜面试管培养基的原料和重量为：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g，加水至1000ml，自然pH；B、液体摇瓶种子培养在250ml容器中装入100ml液体摇瓶种子培养基，在高温高压下灭菌，待自然冷却至室温，将斜面菌种接种到液体摇瓶种子培养基上，在温度25±1℃、转速130r/min、黑暗条件下恒温振荡培养10d，得到液体摇瓶种子；液体摇瓶种子扩大培养：在500ml容器中装入200ml液体摇瓶种子培养基，高温高压灭菌，待自然冷却至室温，用高速匀浆器将所述液体摇瓶种子打散，接种到500ml容器的液体摇瓶种子培养基中，每瓶接种量为20ml，在温度25±1℃、转速130r/min、黑暗条件下恒温振荡培养9d，得到扩大培养的液体摇瓶种子；液体摇瓶种子培养基的原料和重量为：葡萄糖40g、蛋白胨10g、酵母浸出粉10g，加水至1000ml，自然pH；C、菌丝培养在400ml容器中加入20g小麦片，按料液比1:2的比例加入子实体栽培营养液，搅拌均匀，封口，浸泡2小时，温度121℃高温灭菌20min，自然冷却，得到固体培养基；用高速分散器将扩大培养的液体摇瓶种子打散，作为种子液接种到固体培养基上，每瓶接种量为9ml；紧密封口，置于25℃的人工气候箱中，温度25℃，培养10~15d，菌丝培养阶段，需保持黑暗条件，使菌丝铺满固体培养基表面；子实体栽培营养液的原料和重量为：马铃薯200g、黄粉虫粉100g、葡萄糖10g、麦芽糖10g、蛋白胨10g、硫酸镁1.5g、磷酸二氢钾3g、复合维生素B 280mg·L‑1、柠檬酸三胺0.4g，加水至1000ml，pH6；D、子实体培养将菌丝铺满固体培养基表面的容器置于温度为25±1℃条件下的人工模拟环境培养室中培养；在子实体培养阶段保证连续的光照，光照强度为1～200lux，光照时间24h；在子实体基本长满罐头培养瓶，几乎不再生长并保持健壮的时候采收，即得到人工培养的长座虫草子实体；人工培养的长座虫草的子实体有时混有大量白色孢梗束，子实体致密，子座棒状，单生或分枝，肉桂色，高约1~7cm，直径1～3mm；孢梗束丛生，致密，白色或白色略带微红色；在子实体培养后期，子座顶部或侧面也会生出大量白色孢梗束。