[发明专利]介导ZMIZ1靶向敲除的转录激活子样效应因子核酸酶及其制法和应用

摘要

本发明涉及介导ZMIZ1靶向敲除的转录激活子样效应因子核酸酶及其制法和应用。具体地，本发明涉及一种可以对人细胞内源的ZMIZ1基因高效打靶的转录激活子样效应因子核酸酶（TALEN）基因的人工合成方法，以及用含有该基因的重组质粒进行定向打靶的方法。本发明提供的转录激活子样效应因子核酸酶含有一对转录激活子样效应因子（TALEs）蛋白及分别与其融合的DNA内切酶的催化亚基，具有分别识别并切割人ZMIZ1基因上的两个相邻位点的功能。在对TALEs的氨基酸序列进行设计的基础上，合成了编码该TALEN的核苷酸序列及构建了包含该核苷酸序列的载体，通过用TALENs质粒转染细胞，可以大大地提高细胞打靶的效率。

主权项

一种分离的多肽1，其特征在于，所述的多肽1任选自下组：(1)具有SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的多肽；或(2)与SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的多肽同源性≥90%，较佳地≥95%，更佳地≥98%，最佳地≥99%的多肽；优选地，所述的多肽1具有选自下组的功能：(1)特异性地识别序列如SEQ ID NO:10所述的核苷酸，或如SEQ ID NO:10所述的核苷酸经一个或多个（较佳地2个）核苷酸取代所衍生的核苷酸；(2)特异性地识别序列如SEQ ID NO:13所述的核苷酸，或如SEQ ID NO:13所述的核苷酸经一个或多个（较佳地2个）核苷酸取代所衍生的核苷酸。