[发明专利]火锅底料中多种合成色素的同时测定方法

摘要

本发明公开了一种火锅底料中多种合成色素的同时测定方法。该方法包括火锅底料中新红、苋菜红、胭脂红、诱惑红、赤藓红、日落黄、酸性红G、酸性大红GR、罗丹明B、对位红、苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ、苏丹橙G和苏丹红7B等多种合成色素的提取、浓缩、净化和同时检测方法。本发明提供的火锅底料中多种合成色素的同时测定方法具有步骤简便、准确度和精密度高的优点。

主权项

1.火锅底料中多种合成色素的同时测定方法，步骤如下：1）提取样本称取5.00g待测试样于50mL离心管中，加入20mL甲醇-丙酮溶液，60℃水浴10min，油脂融化后旋涡混匀，5000rpm离心5min，将上清液转移至150mL旋蒸瓶中；加入20mL甲醇-丙酮溶液，重复上述操作1次；加15mL 2mol/L尿素甲醇溶液，重复上述操作2次；合并每次上清液于旋蒸瓶中，40℃下旋蒸浓缩至近干；2）分离净化样本分别用5mL乙酸乙酯-环己烷溶液、5mL水洗涤步骤1）中旋蒸瓶各2次，并将洗涤液转移至50mL离心试管中，旋涡混匀1min，5000rpm离心5 min；将离心试管中乙酸乙酯-环己烷层转移至10mL比色管中，40℃下氮气浓缩至近干，用乙酸乙酯-环己烷溶液溶解比色管中残渣并定容至5mL，得待GPC净化的脂溶性样本；向离心试管水相中加入1mL磷酸溶液，混匀，得待SPE净化的水溶性样本；A、SPE净化将水溶性样本全部转移至聚酰胺树脂层析柱中，以2～3mL/min流经层析柱，同时用5mL 0.1%磷酸溶液洗涤离心试管并转移至层析柱中，待试液刚刚到达层析柱顶端时，再向层析柱中加入5mL 80%甲醇溶液淋洗并抽空，最后用10mL 5%氨水-甲醇溶液洗脱，弃去前3mL洗脱液，收集后7mL洗脱液于10mL比色管中，并用甲醇定容至刻度，得SPE净化样本；B、GPC净化将脂溶性样本按如下程序进行GPC净化，得到GPC净化样本；凝胶渗透色谱仪：净化柱400 mm×25 mm，内装Bio-Beads，S-X3，38 μm～75 μm填料；流动相：环己烷-乙酸乙酯；流速：4.7 mL/min；进样量：4.5 mL；开始收集时间：13 min；结束收集时间：20 min；3）浓缩SPE净化样本和GPC净化样本将32.9mL GPC净化样本和9.0mL SPE净化样本转移至同一旋蒸瓶中，40℃下旋蒸浓缩至近干，用5mL甲醇-丙酮溶液洗涤旋蒸瓶并转移至刻度试管中，在40℃下氮气浓缩近干，加入0.9mL甲醇-丙酮溶液溶解刻度试管中残渣，过滤膜过滤后，供 HPLC测定；4）HPLC测定条件色谱柱：C₁₈；流动相：甲醇-0.01mol/L磷酸盐缓冲液，梯度洗脱；检测波长：程序可变波长，0～13.7min 520nm；13.71～15min 420nm；15.01～30min 520nm；柱温：30℃；流速：1.0mL/min；进样量：10μL；后运行时间：5.0min；获得液相色谱图；5）结果计算用色谱数据处理机或按公式（1）计算试样中合成色素的含量，计算结果须扣除空白值：（1）式中：X_i ──待测试样中待测物质的含量，单位为毫克每千克；c_i ──从液相色谱图上得到的待测物质的溶液浓度，单位为微克每毫升；V ──样液最终定容体积，单位为毫升；m ──最终样液所代表的待测试样质量，单位为克。