[发明专利]利用锌指核酸酶敲除牛整合素β6亚基基因的方法有效
| 申请号： | 201210114541.8 | 申请日： | 2012-04-18 |
| 公开（公告）号： | CN102660577A | 公开（公告）日： | 2012-09-12 |
| 发明（设计）人： | 何洪彬;武建明;王洪梅;刘晓;刘文浩;方永志;仲跻峰 | 申请（专利权）人： | 山东省农业科学院奶牛研究中心 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N5/10;C12N15/873;A01K67/027 |
| 代理公司： | 济南圣达知识产权代理有限公司 37221 | 代理人： | 杨琪 |
| 地址： | 250100 山东省*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用锌指核酸酶(ZFNs)敲除牛整合素β6亚基基因的方法，其是根据牛整合素β6基因序列，设计可特异性识别该基因的锌指核酸酶ZFNs，构建表达载体并转染牛的细胞，如成纤维细胞，获得整合素β6亚基基因敲除的细胞。本发明利用ZFNs介导的基因敲除技术，设计合成了可特异性识别并切割整合素β6亚基基因的一对ZFNs，并成功获得整合素β6亚基双等位基因敲除的转基因克隆牛。利用一次转染，得到双等位基因敲除的细胞克隆，省去了药物筛选过程，促进了细胞单克隆的形成，提高了后续转基因胚胎的发育率。在转基因动物体内不含有外源基因，减少了对外源基因生物安全评价的环节。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 核酸酶 整合 基因 方法 | ||
【主权项】：
一种利用锌指核酸酶敲除牛整合素β6亚基基因的方法，其是根据牛整合素β6基因序列，设计可特异性识别该基因的锌指核酸酶，构建ZFN重组表达载体并转染牛的细胞，获得整合素β6亚基基因敲除的细胞，其特征在于：所设计的一对ZFNs可特异性识别并剪切整合素β6亚基基因，其识别及剪切的β6亚基基因序列如下：TGTTCTTTCTATGTCtaggaaGGAATGATCACGTACAAG；其中，大写字母表示的序列为识别的序列，小写字母表示的序列为剪切的序列。
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