[发明专利]纳米粒油佐剂疫苗的制备方法

摘要

纳米粒油佐剂疫苗的制备方法，涉及一种纳米粒油佐剂疫苗的制备方法。本发明提供一种纳米粒油佐剂疫苗的制备方法，如下：取壳聚糖溶液或N-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖溶液，加新城疫病毒液，得溶液A；向溶液A加三聚磷酸钠，再加PBS缓冲液，搅拌后加司班-80，得溶液B；将溶液B离心，取上清液，为溶液B1，沉淀经去离子水悬浮，为溶液B2；将注射用白油高温灭菌，加入司班-80，冷却得溶液C1；取溶液B1，加入吐温-80，得溶液C2；将溶液C1中加溶液C2，搅拌得溶液C；向溶液C中加溶液B2，搅拌即得纳米粒油佐剂疫苗。本发明制备载病毒纳米粒粒径小，包封率高、载药量大、制备条件温和、制备工艺简单，生产成本较低。

主权项

纳米粒油佐剂疫苗的制备方法，其特征在于纳米粒油佐剂疫苗的制备方法，按以下步骤进行：一、取5mL浓度为0.5～2mg/mL的壳聚糖溶液或5mL浓度为0.5～2mg/mL的N‑2‑羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖溶液，向其中滴加1.25～7.5mL新城疫L‑系病毒液，搅拌均匀，获得溶液A；二、将溶液A在室温、无菌条件下以900～1300r/min磁力搅拌30s，然后向溶液A中滴加2.5mL浓度为0.5～3mg/mL的三聚磷酸钠，搅拌均匀后匀速滴加1mL pH值7.4的PBS缓冲液，搅拌均匀后再匀速滴加1mL的司班‑80，获得溶液B；三、将溶液B于4℃、13000r/min离心30min，吸取上清液，为溶液B1，沉淀经去离子水悬浮，为溶液B2；四、将94份注射用白油于160℃高温灭菌30min，然后加入6份司班‑80，在160℃维持10min，然后冷却至室温，得溶液C1；取96份溶液B1，加入4份吐温‑80，混合均匀，得溶液C2；五、将溶液C1置于组织捣碎器内搅拌，同时滴加溶液C2，于8000～10000r/min搅拌5～20min，得溶液C；六、将溶液C置于磁力搅拌器内搅拌，同时滴加溶液B2，于900～1300r/min搅拌5～15min，即得到纳米粒油佐剂疫苗；其中步骤五中溶液C1与溶液C2的体积比为1～3∶1；步骤六中溶液C和溶液B2的体积比是1～2∶1。