[发明专利]一种基于哺乳动物囊胚的分子免疫检测的胚胎质量分析方法

摘要

本发明公开了一种基于哺乳动物囊胚的分子免疫检测的胚胎质量分析方法，以分别在囊胚的内细胞团和滋养外胚层细胞中表达的OCT4和CDX2关键转录因子的表达作为分析哺乳动物囊胚的依据，根据其免疫染色结果来进行细胞水平、分子水平的分析，既涵盖传统的囊胚质量评定方法，又提出了准确性更高的谱系分化来进行评定：选择内细胞团细胞数和滋养外胚层细胞比值合适、第一次谱系分化完全的囊胚作为质量好的囊胚。与传统的囊胚质量评定方法相比，本发明不但可以从细胞水平来评定囊胚的质量，还可以从分子水平准确的对囊胚的质量和以后的发育潜能进行评定，方法简单且准确率高，能够为胚胎移植提供技术支持。

主权项

一种基于哺乳动物囊胚的分子免疫检测的胚胎质量分析方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将哺乳动物囊胚置入含有一抗的免疫染色液中，于4℃孵育12～16h，然后进行清洗；所述的一抗包括抗OCT4和抗CDX2的单克隆或多克隆抗体；2)以染料标记的能够分别与一抗结合的抗体作为二抗，在避光条件下，将与一抗结合后的哺乳动物囊胚在含二抗的免疫染色液中，于室温避光孵育1h，然后进行清洗；3)将哺乳动物囊胚放在载玻片上，滴加抗荧光淬灭封片液后用盖玻片压好，荧光显微镜照相获得照片；4)根据照片进行囊胚质量的分析：细胞水平：OCT4阳性的细胞为内细胞团细胞，CDX2阳性的细胞为滋养外胚层细胞，二者细胞数之和为囊胚的总细胞数，二者细胞数之比为内细胞团细胞数和滋养外胚层细胞数之间的比值；分子水平：OCT4蛋白完全在内细胞团细胞中定位，则第一次谱系分化完全，囊胚发育正常，囊胚质量好；OCT4蛋白在内细胞团细胞和滋养外胚层细胞中均有定位，则第一次谱系分化不完全，囊胚发育异常，囊胚的质量不高；5)选择内细胞团细胞数和滋养外胚层细胞数比值在0.3～0.45、第一次谱系分化完全的囊胚作为质量好的囊胚。