[发明专利]抗p185erbB2人鼠嵌合抗体慢病毒表达载体及其构建方法

摘要

本发明公开了一种抗p185erbB2人鼠嵌合抗体慢病毒表达载体及其构建方法，利用PCR法扩增出抗人p185erbB2鼠源性单抗可变区基因(vH和vL)和人IgG1的恒定区基因(γ1和κ)，再采用三引物PCR法将vH和γ1，vL和κ进行拼接，得到嵌合重链(H)和嵌合轻链(L)基因，分别插入质粒pVAX1/IRES的IRES元件的上、下游，用内切酶将H-IRES-L从pVAX1/H-IRES-L上切下，插入慢病毒载体pWPI中，构建成慢病毒表达pWPI/H-IRES-L。经相应酶切和测序鉴定，与预期设计一致。转染293T细胞后，有嵌合重链和嵌合轻链基因的共同表达，而且嵌合抗体能够与p185erbB2分子特异性结合。本发明为今后抗p185erbB2工程抗体的研究奠定了基础。

主权项

一种抗p185erbB2人鼠嵌合抗体慢病毒表达载体，其特征在于该载体是pWPI/H‑IRES‑L，其中H和L分别是抗p185erbB2人鼠嵌合抗体重链基因和抗p185erbB2人鼠嵌合抗体轻链基因。