[发明专利]一种棕色棉胚性愈伤组织的诱导和培养方法

摘要

本发明公开了一种棕色棉胚性愈伤组织的诱导和培养方法，包括有以下步骤：棕色棉种子消毒后剥去种皮进行培养，得到无菌苗下胚轴；无菌苗下胚轴置于棕色棉愈伤组织诱导培养基上进行诱导培养；转接至棕色棉愈伤组织增殖培养基并继代培养；转入棕色棉愈伤组织分化培养基，继代培养得到胚性愈伤组织；再进行扩繁培养。本发明的有益效果为：本发明提供的棕色棉胚性愈伤组织的诱导和培养方法，耗时短，诱导率高，拓展了可再生棉花的基因型，适应于彩棉的棕色棉品种，对该类型的彩棉转基因研究具有技术支撑作用。

主权项

棕色棉胚性愈伤组织的诱导和培养方法，其特征在于，包括有以下步骤：1）棕色棉种子人工脱壳后，再经过消毒处理，得到无菌棕色棉种子，再将无菌棕色棉种子加适量无菌水放入摇床中遮光悬浮暗培养24‑36小时，在胚根生长至0.8‑1.2cm时，接种于1/2所有元素减半的MSB培养基中，暗培养3‑5天，得到2‑4cm长的无菌苗下胚轴；2）将步骤1）得到的无菌苗下胚轴在无菌条件下切为5‑8mm小段，并置于棕色棉愈伤组织诱导培养基上进行诱导培养30天，得到初级培养棕色棉愈伤组织；3）将步骤2）得到的初级培养棕色棉愈伤组织转接至棕色棉愈伤组织增殖培养基并继代培养2次，继代培养周期为25天，得到增殖后棕色棉愈伤组织；4）将步骤3）得到的增殖后棕色棉愈伤组织转入棕色棉愈伤组织分化培养基，继代培养2‑3次，继代培养周期为25天，得到胚性愈伤组织；5）将步骤4）得到的胚性愈伤组织置于棕色棉胚性愈伤组织增殖培养基上，进行扩繁培养。