[发明专利]一种红皮云杉离体快速繁殖方法

摘要

一种红皮云杉离体快速繁殖的方法，该方法包括如下步骤：1)外植体诱导材料消毒的方法；2)不定芽诱导和继代增殖；3)丛生芽诱导；4)生根培养；5)试管苗移栽。利用本方法，经10-20天培养便可得以诱导芽分化，20-30天为1个继代增殖周期，经10-15天培养便可得以诱导丛生芽，经20-25天培养便可生出根毛，生根率最高达到了95%，整个繁殖周期最短达到了40天，相对于现有技术缩短了繁殖周期，提高了繁殖效率，增加了经济效益。

主权项

一种红皮云杉离体快速繁殖的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：1)、外植体诱导材料消毒的方法：在生长季节选取生长旺盛红皮云杉的3～4厘米长的顶芽或带侧芽的茎段为外植体，将嫩芽依次在75％的酒精、0.15％的HgCl2、1.5％的次氯酸钠溶液中进行消毒灭菌处理，其时间依次是消毒20‑40秒，灭菌10‑30分钟，再消毒10‑20分钟，最后用无菌水漂洗至少2次；2)、不定芽诱导和继代增殖：将经过消毒灭菌后的上述嫩芽在无菌工作环境中接种于下列诱导培养基中：3/4MS培养基、6‑BA 0.0‑2.0mg/L、0.3‑1.0mg/L玉米素ZT、蔗糖30‑40g/L、活性炭1mg/L、琼脂7‑8g/L；培养条件为：控制PH为6.5，温度20‑25℃,13‑15小时的光周期，光照强度1200‑1800LX，经10‑20天培养便可得以诱导芽分化；将诱导出的不定芽切割后再继代培养在相同的培养基中在相同的条件下增殖，20‑30天为1个继代增殖周期，每1个继代增殖周期由1个芽可增殖形成3～4个芽；3)、丛生芽诱导：将继代培养得到的不定芽接种于下列诱导培养基中进行丛生芽诱导：1/2MS培养基、赤霉素0.01‑0.1mg/L、萘乙酸0.01‑0.1mg/L、蔗糖30‑40g/L、活性炭1mg/L、琼脂7‑8g/L；培养条件为：控制PH为6.5，温度18‑22℃,11‑12小时的光周期，光照强度1000‑1500LX，经10‑15天培养便可得以诱导丛生芽；4)、生根培养：将丛生芽诱导得到的不定芽接种于下列诱导培养基中进行生根诱导：1/2MS培养基、吲哚丁酸0.1‑1.0mg/L、萘乙酸0.01‑0.1mg/L、蔗糖30‑40g/L、活性炭1mg/L、琼脂7‑8g/L；培养条件为：控制PH为6.5，温度18‑20℃,16‑18小时的光周期，光照强度1400‑1600LX，经20‑25天培养便可生出根毛，生根率可达90‑95％，每个分化芽有根4～5条；5)、试管苗移栽：当不定根长至1.0厘米时，打开瓶口的封口膜，在光照培养室内炼苗3‑4天，然后用镊子把试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入装有基质的容器内。