[发明专利]仔猪水肿病毒素亚单位灭活疫苗的制备方法

摘要

本发明涉及一种是用于预防仔猪水肿病的stx2e毒素亚单位灭活疫苗的制备方法。本发明是用产类志贺氏毒素II型变异体(stx2e毒素)的大肠埃希氏菌，接种于适宜培养基培养，提取stx2e毒素亚单位抗原，灭活后与油佐剂混合乳化制成。用于预防仔猪水肿病。本发明所涉及的仔猪水肿病的stx2e毒素亚单位灭活疫苗使用剂量小，免疫效力高，安全性好，对仔猪的生长没有任何不良影响，为防治仔猪水肿病奠定了坚实的基础。

主权项

一种预防仔猪水肿病的stx2e毒素亚单位疫苗的制备方法，其特征在于主要包括一下几个步骤：(1)生产用种子制备将冻干的大肠埃希氏菌(Escherichia coli)EDQD株菌种接种SB液体培养基，接种固体琼脂平板，挑取典型菌落若干，经PCR鉴定毒素基因合格后，即可用于接种，该菌株已于2011年11月22日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC No.5484；(2)菌液培养采用发酵培养法培养菌液，菌液经管式离心机离心，菌泥按0.1g/ml比例重新悬浮于生理盐水中；(3)毒素提取对重悬菌液进行超声波裂解，加入40％饱和度硫酸铵，经连续流离心机离心，弃沉淀，上清中继续加入度硫酸铵至60％饱和度，经连续流离心机离心，沉淀重悬与原菌液体积1/20，经戊二醛溶液灭活后，置2～8℃保存备用；(4)按常规矿物油佐剂灭活疫苗的方法配制成矿物油佐剂亚单位疫苗。