[发明专利]血清中PCDH10的TRFIA法检测用试剂盒

摘要

本发明公开了一种血清中PCDH10的TRFIA法检测用试剂盒，包括：PCDH10N-端融合蛋白、能与PCDH10N-端融合蛋白结合的第一抗体和PCDH10C-端融合蛋白、能与PCDH10C-端融合蛋白及镧系金属离子络合物结合的第二抗体，应用于检测血清样品中PCDH10蛋白的时间分辨荧光免疫检测方法。与现有技术相比，本发明在应用中具有较长荧光寿命，可排除标本中非特异性荧光的干扰，所得信号完全是镧系金属离子络合物发射的特异荧光。另外其激发光与荧光的波长转变达270nm，可有效排除激发光的干扰，测得的荧光为镧系金属离子络合物发出的特异性荧光信号。所测得的荧光信号强度与待测样品含量成正比。

主权项

一种血清PCDH10的TRFIA法检测用试剂盒，具有能与PCDH10C‑端融合蛋白结合并被Eu3+络合物标记的第二抗体冻干品；该第二抗体冻干品是经1)以聚合酶链式反应将PCDH10C 3’端碱基序列克隆至原核细胞，构建PCDH10C端融合蛋白的原核细胞表达载体；2)将表达载体转化BL21DE3pLysS大肠杆菌，建立PCDH10C端融合蛋白的原核细胞表达系统，用His金属螯和树脂纯化PCDH10C端融合蛋白，用Thrombin酶切除PCDH10C端融合蛋白N端的His‑tag标签，得到PCDH10C端融合蛋白；3)用己切除标签的PCDH10C端融合蛋白作为抗原免疫大白兔，产生抗PCDH10C端抗体，收集抗血清，用硫酸铵沉淀、透析、Protein A‑Sepharose亲和柱纯化所得；其特征是：还有包被有具有固相结合部分及能与PCDH10N‑端融合蛋白结合的第一抗体的多孔型微量滴度板。