[发明专利]基于农药介入后转Bt基因水稻对褐飞虱生态安全性评价的方法

摘要

本发明涉及农药介入后转Bt基因水稻对褐飞虱安全性评价的方法，即选用三唑磷和井冈霉素两种农药，在水稻分蘖期，模拟稻田喷雾施药法，分别向转Bt基因和亲本对照水稻用药，药后24h采集长势一致的水稻中下部茎杆，用以在光照培养箱内饲养褐飞虱初孵若虫，记录褐飞虱种群生长参数，分析对比种群发生指数；每穴盆栽水稻接100头3龄若虫，每24小时检查一次若虫存活情况，接虫后7d和14d观察比较水稻的受害级别；对农药处理后7天的两种水稻测定比较草酸含量。本发明为转Bt基因水稻对非靶标重要害虫褐飞虱危害的生态安全评价增加了切实性，且成本低、易于推广。

主权项

基于农药介入后转Bt基因水稻对褐飞虱安全性评价的方法，其特征在于：1）农药的选择：三唑磷和井冈霉素原药，浓度设置：三唑磷10、20、40、80ppm；井冈霉素100、200、400、800ppm；2）处理方法：采用盆栽水稻接虫法，喷雾法施药；3）喷药：在分蘖期喷洒盆栽水稻，喷洒时按农药浓度由低到高的顺序喷施，喷雾处理水稻叶片和茎干部分；处理后的盆栽水稻覆盖网罩，每个处理和对照均设置5个重复，以喷水作为对照代表未用农药处理；4）安全性考察：①褐飞虱种群生命参数：转Bt基因水稻和亲本对照水稻同时分别喷药24h后，采集长势一致的水稻中下部茎杆，置于玻璃杯内，两株水稻/杯，后每杯接初孵褐飞虱若虫10头，在光照培养箱内培育，每个处理5次重复；采用褐飞虱室内种群生命表法，记录处理过程中褐飞虱种群的生命参数―各龄期存活率及龄期、成虫羽化率、雌雄比、长短翅型比、雌虫寿命，计算种群趋势指数；②水稻受害级别：在喷药24h后用80目纱网罩住盆栽水稻，每穴水稻接入100头3龄若虫，每盆300头，对照用水喷洒，所有供试水稻在自然田间下生长，每个对照和处理20次重复，每24小时检查一次若虫的存活情况，并作相应的若虫补充；分别在水稻接虫后7d和14d观察受害级别；③水稻植株草酸：采用三氯化钛显色法测定草酸含量，取农药处理后7天的水稻植株，称重后用组织捣碎机破碎后过滤取汁，加入活性炭，加入量为原汁体积的1/4，在常温下脱色30min，然后用80‑2型离心机分离活性炭，离心机转速为3000 r/min，溶液呈无色或呈乳白色后，取3ml稻汁加入0.15ml浓度为1%三氯化钛溶）显色，在分光光度计上于400 nm下测定吸光值，用草酸配制标准曲线，求出回归方程，由此求出草酸的含量。