[发明专利]高产S-腺苷蛋氨酸的巴斯德毕赤酵母菌株的构建方法无效
| 申请号： | 201210012182.5 | 申请日： | 2012-01-16 |
| 公开（公告）号： | CN103087934A | 公开（公告）日： | 2013-05-08 |
| 发明（设计）人： | 于平 | 申请（专利权）人： | 浙江工商大学 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12N15/54;C12N15/81;C12N15/09;C12P19/40;C12R1/84 |
| 代理公司： | 浙江杭州金通专利事务所有限公司 33100 | 代理人： | 徐关寿 |
| 地址： | 310018 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种高产S-腺苷蛋氨酸的巴斯德毕赤酵母菌株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：从酿酒酵母基因组中PCR扩增出S-腺苷蛋氨酸合成酶基因sam2，连接至质粒pPIC9K中，得到真核表达载体pPIC9K-sam2，然后将其转化到巴斯德毕赤酵母；从毕赤酵母基因组中PCR扩增出胱硫醚β合成酶基因cbs，将其亚克隆至载体pMD19T中，得到重组载体T-cbs；将博莱霉素抗性基因zeocin导入重组载体T-cbs的胱硫醚β合成酶基因，得到cbs基因敲除质粒T-C-Z，酶切后获得cbs基因敲除片段C-Z；将片段C-Z转化至步骤1所得的包含pPIC9K-sam2的巴斯德毕赤酵母，得到敲除cbs基因又强化sam2基因的高产S-腺苷蛋氨酸的巴斯德毕赤酵母菌株。 | ||
| 搜索关键词： | 高产 腺苷 蛋氨酸 巴斯德毕赤 酵母 菌株 构建 方法 | ||
【主权项】：
高产S‑腺苷蛋氨酸的巴斯德毕赤酵母菌株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）从酿酒酵母基因组中PCR扩增出S‑腺苷蛋氨酸合成酶基因sam2，连接至质粒pPIC9K中，得到真核表达载体pPIC9K‑sam2，然后将其转化到巴斯德毕赤酵母；（2）从毕赤酵母基因组中PCR扩增出胱硫醚β合成酶基因cbs，将其亚克隆至载体pMD19T中，得到重组载体T‑cbs；将博莱霉素抗性基因zeocin导入重组载体T‑cbs的胱硫醚β合成酶基因，得到cbs基因敲除质粒T‑C‑Z，酶切后获得cbs基因敲除片段C‑Z；（3）将片段C‑Z转化至步骤1 所得的包含pPIC9K‑sam2的巴斯德毕赤酵母，得到敲除cbs基因又强化sam2基因的高产S‑腺苷蛋氨酸的巴斯德毕赤酵母菌株。
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