[发明专利]以根为外植体的诺丽愈伤组织的诱导及植株再生的方法

摘要

以根为外植体的诺丽愈伤组织的诱导及植株再生的方法，属于用植物离体外植体的培养方法，特别是诺丽的外植体离体培养的方法。以诺丽试管苗的根为外植体，在添加不同浓度6-BA的MS培养基上进行离体培养，进行愈伤组织诱导。结果表明，最适合的愈伤组织诱导培养基是MS+1.5mg/L6-BA，诱导出的愈伤组织多数为土黄色，颗粒状，硬度适中；最适合愈伤组织继代的培养基也是MS+1.5mg/L6-BA，成活率达91.25%；愈伤组织在6-BA浓度为1.0mg/L、1.5mg/L的MS培养基中，不定芽分化率分别为24.13%和23.64%；愈伤组织上诱导出的芽可长成健壮的完整植株。

主权项

以根为外植体的诺丽愈伤组织的诱导及植株再生的方法，步骤包括：（1）愈伤组织的诱导：将诺丽无菌苗的根切下，剪成0.5cm～1cm的小段作为外植体，轻轻接入培养基中，并使外植体充分与培养基接触，培养基为MS培养基（附加3%蔗糖和6‰琼脂粉）+1.5mg/L 6‑BA，接种约15天陆续形成细小颗粒状愈伤，颜色呈土黄色或绿色，硬度适中； （2）愈伤组织上不定芽的诱导：于20天时观察，愈伤组织上陆续分化出不定芽，待不定芽长到约1cm时将其切下，于MS培养基（附加3%蔗糖和6‰琼脂粉）+1.0 mg/L 6‑BA或MS培养基（附加3%蔗糖和6‰琼脂粉）+1.5 mg/L 6‑BA下培养35天～40天；（3） 不定芽的再生：当步骤（2）中长出的不定芽长到1cm～2cm时，将其剪下，接入MS培养基（附加3%蔗糖和6‰琼脂粉）+1.0 mg/L 6‑BA 的中培养约30天；（4） 壮苗生根：从步骤（3）培养得到的健壮植株中，切取茎尖或长约1 cm的其它带芽茎段，接种于MS培养基（附加3%蔗糖和6‰琼脂粉）+0.3 mg/L NAA中诱导生根，培养30～50天，得到完整植株；     （5） 移栽：    将诺丽根系已发育良好的培养瓶移至遮光率75%的温室中炼苗7天后，从培养瓶中移出诺丽试管苗，洗去琼脂，剪去根部附近的叶片，移植到苗盘中，适量喷水保持叶片及土壤湿润，在自然光照下正常管理；以上MS培养基pH值为5.8；培养基均在1.1 kg/cm2的压力、121℃下灭菌20 min；愈伤组织的诱导培养试验均在25±2℃和2000 lx光照强度下进行，每天光照12h。