[发明专利]一种血浆HSP70抗体检测试剂盒无效
申请号: | 201110376632.4 | 申请日: | 2011-11-23 |
公开(公告)号: | CN102507950A | 公开(公告)日: | 2012-06-20 |
发明(设计)人: | 钱令嘉;冷雪;战锐 | 申请(专利权)人: | 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 |
主分类号: | G01N33/577 | 分类号: | G01N33/577 |
代理公司: | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人: | 史双元 |
地址: | 100850*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | 本发明公开了属于抗体检测技术领域的一种血浆HSP70抗体检测试剂盒。该试剂盒包括固化HSP70蛋白的酶标板、HSP70单克隆抗体标准品、辣根酶标记的抗体、抗体稀释液、洗涤缓冲液、底物显色液A液、底物显示液B液和终止液。本发明的试剂盒检测灵敏度高,准确性强、成本低,可以同时检测组织提取液、血浆和血清中的HSP70抗体。 | ||
搜索关键词: | 一种 血浆 hsp70 抗体 检测 试剂盒 | ||
【主权项】:
一种血浆HSP70抗体检测试剂盒,其特征在于,该试剂盒包括固化HSP70蛋白的酶标板、HSP70单克隆抗体标准品、辣根酶标记的抗体、抗体稀释液、洗涤缓冲液、底物显色液A液、底物显示液B液和终止液;所述HSP70单克隆抗体标准品是用下述方法制成:(1)HIS‑HSP70蛋白重组表达先设计上游引物:5’‑CGGAATTCATGGCCAAGAAAACAGCG‑3’,下游引物:5’‑CCCAAGCTTCTAATCCACCTCCTCGAT‑3’;PCR扩增,双酶切连入PET‑32a载体中,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,纯化,SDS胶鉴定纯度,透析后冷冻干燥,即制成HIS‑HSP70重组蛋白,分装,‑70℃冻存;(2)HSP70单克隆抗体标准品制备用2mg/ml的HIS‑HSP70重组蛋白作为免疫抗原,选用18‑20g的Balb/c雌鼠作为免疫动物,并取其脾细胞与SP2/0细胞融合,ELISA筛选、亚类鉴定、腹水制备,纯化HSP70单克隆抗体,对纯化抗体进行蛋白定量,分装,制成HSP70单克隆抗体标准品;所述固化HSP70蛋白的酶标板是用下述方法制成:用HIS‑HSP70重组蛋白作为包被抗原,以含浓度为1μg/ml的重组HIS‑HSP70重组蛋白的包被液包被酶标板,4℃过夜,洗板三次,拍干,4℃保存。
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