[发明专利]一种用于鲤鱼雌雄鉴别的方法

摘要

本发明公布了一种用于鲤鱼雌雄鉴别的方法，以斑马鱼BMP4基因序列为模版成功获得鲤鱼BMP4基因的cDNA序列，并在此基础上获得了鲤鱼BMP4基因的多克隆抗体，通过western技术检测发现：雄鱼可以检测到BMP4基因的表达，而雌鱼却无法检测到BMP4基因的表达，从而通过BMP4基因表达的检测可将鲤鱼雌雄鉴别开来，这也就为鲤鱼的早期雌雄鉴别提供了检测技术。

主权项

一种用于鲤鱼雌雄鉴别的方法，其特征在于按如下步骤实现：（1）提取雌雄鲤总RNA；（2）获得鲤鱼Cyprinus carpioBMP4基因cDNA序列：根据斑马鱼BMP4基因序列Genbank 登录号AF402958设计引物序列为上游引物：F:5’‑ gatacccgaggaagggaaga‑3’；下游引物：R:5’‑ ggggtgtggctgccgctaaa ‑3’，获得鲤鱼的BMP4的cDNA，并根据上述cDNA对应氨基酸序列设计多肽，合成多肽，并对多肽进行修饰获得鲤鱼BMP4多肽，其氨基酸序列为QVLLGESSYASLIPEEGKc，其中c为增加的cys，用于多肽偶联；（3）用鲤鱼BMP4多肽免疫新西兰大白兔，制备兔抗BMP4血清；（4）用BMP4多肽对兔血清进行抗原亲和纯化，纯化后获得鲤鱼BMP4多克隆抗体，抗体进行ELISA效价检测，结果显示，ELISA Titer大于1:128000；（5）用鲤鱼BMP4多克隆抗体western技术检测雌雄鲤鱼背部肌肉中BMP4基因的表达，结果显示雄性鲤鱼有BMP4蛋白的表达，而在雌性鲤鱼中没有检测到BMP4蛋白的表达。