[发明专利]一种水产品中痕量藻毒素含量的检测方法

摘要

本发明涉及一种水产品中痕量藻毒素含量的检测方法，属于分析化学领域，更具体涉及水产品中污染物的检测技术领域。本方法将富集纯化技术与超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF-MS）联用相结合，对水产品中微囊藻毒素和节球藻毒素定量分析，其处理步骤包括：超声提取、固相萃取纯化、超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用技术快速测定水产品中的微囊藻毒素MC-RR、MC-YR、MC-LR和节球藻毒素NOD。本发明建立的方法能够快速分析水产品中的藻毒素含量，其灵敏度高、专属性好，易于操作且回收率高。

主权项

一种水产品中痕量藻毒素含量的检测方法，其特征在于：称取一定量的样品用溶剂浸泡，采用超声辅助萃取方式，将藻毒素萃取到溶剂中，通过离心分离，减压浓缩后，将藻毒素提取浓缩液上固相萃取柱，洗脱液氮吹浓缩，定容后直接用于超高效液相色谱‑四极杆‑飞行时间质谱分析；该方法依次包括以下步骤：（1）、样品的提取：将冷冻干燥的水产品样品粉碎均匀，按0.20 g干粉加正丁醇‑甲醇‑水体积比1︰4︰15抽提液5‑10mL比例，浸泡10 min后，超声波功率为150‑250W，超声10 min，12000 r/min离心10‑15 min，移取上层清液，沉淀用同前的条件再抽提两次，合并上清液，40℃以下减压浓缩至5 mL；（2）、样品的富集及纯化：采用已活化的500mg C18固相萃取柱对步骤（1）得到的浓缩液上样富集藻毒素，控制流速1mL/min；依次用纯水、10% 的甲醇水溶液各3‑5mL 冲洗固相萃取柱，控制流速2mL/min；最后用5‑10 mL 0.05%‑0.1%三氟乙酸的甲醇溶液洗脱柱上藻毒素，控制流速2‑3mL/min，洗脱液在30℃条件下氮吹浓缩，于‑18℃冷冻保存；（3）、色谱分析前将步骤（2）保存的冷冻品用甲醇定容并用0.22 μm 有机滤头过滤，定容体积1.00mL；（4）、超高效液相色谱‑四极杆‑飞行时间质谱分析：液相色谱条件：超高效液相色谱柱：Acquity UPLC BEH C18 柱，2.1 mm×100 mm×1.7 μm，柱温为45℃；流动相为A：水；B：乙腈；A、B均含体积分数0.10%甲酸，流速为0.30 mL/min；梯度洗脱程序为0‑6.0 min：含B：20%‑35%，其余组分为A；6.0‑8.0 min：含B：35%‑100%，其余组分为A；质谱条件：Q‑TOF‑MS 条件: 电喷雾离子源：正离子电离模式ESI+；离子源温度：100℃；脱溶剂气温度：250℃；毛细管电压：3.5 kV；锥脱溶剂气流量：500 L/h；锥孔电压: 30 V；锥孔气流量：50 L/h；四级杆范围 m/z: 100‑1500；碰撞能量：6V；TOF离子飞行方式采用V模式，选择离子监测模式，目标化合物以保留时间和特征离子确定，绘制标准曲线，以外标法进行定量测定。