[发明专利]N-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖的合成及其负载新城疫减毒活疫苗纳米粒的制备方法

摘要

N-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖的合成及其负载新城疫减毒活疫苗纳米粒的制备方法，它涉及壳聚糖的合成及其负载疫苗纳米粒的制备方法。合成：脱乙酰处理的壳聚糖；壳聚糖的浸泡处理；粗制N-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖；精制N-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖。制备：N-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖溶液中加新城疫病毒液，获得溶液A；溶液A中加三聚磷酸钠，PBS和司班-80，获得溶液B；将溶液B离心取沉淀并加PBS悬浮，加海藻糖脱脂奶，冷冻干燥后即完成。本发明制备的纳米粒，粒径容易控制，载药纳米粒粒径小，包封率高、载药量大、制备条件温和、药物毒副作用低、缓释时间长，制备工艺简单，生产成本较低，易于规模化生产。

主权项

N‑2‑羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖的合成，其特征在于合成方法按以下步骤实现：一、将50g脱乙酰度为85％的壳聚糖分散在200mL NaOH的异丁醇溶液中，在90～120℃下回流搅拌反应1h，去除上清液后沉淀用去离子水洗至中性，然后分散在200mL NaOH的异丁醇溶液中，继续回流搅拌反应1.5～8h，去除上清液后沉淀用去离子水洗至中性，获得脱乙酰处理的壳聚糖；二、将2～3g脱乙酰处理的壳聚糖溶于100～150mL体积浓度为1～3％乙酸溶液中，搅拌溶解，真空抽滤，滤去不溶物，获得壳聚糖溶液，然后在500～1000r/min搅拌条件下逐滴加入浓度为0.1～2mol/L的NaOH溶液，调节壳聚糖溶液pH值至8～9并有白色沉淀析出，浸泡8h后抽滤，去离子水洗至滤液呈中性，抽干水分，然后向滤饼中加入15～20mL异丙醇，搅拌30min后倒入三口烧瓶，完成壳聚糖的浸泡处理；三、在N2保护条件下，将步骤二中的三口烧瓶升温至75～85℃，每隔2h逐滴加入2，3‑环氧丙基三甲基氯化铵的异丙醇溶液，每次滴定时间30min，共滴加三次，反应8～14h后将烧瓶冷却至室温，加入150～300mL冷藏处理的无水乙醇，浸泡0.5h后抽滤，冷冻干燥24h，完成壳聚糖与2，3‑环氧丙基三甲基氯化铵开环反应，获得粗制N‑2‑羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖；四、将粗制N‑2‑羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖溶于去离子水，应用3G砂芯漏斗过滤后将滤液在5倍体积冷藏处理的丙酮中沉淀，然后真空抽滤，滤饼分散后冷冻干燥24h，即完成N‑2‑羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖的合成；其中步骤一中NaOH的异丁醇溶液中NaOH的质量分数为15％～40％，异丁醇的量为每克壳聚糖加入10～30mL异丁醇；步骤三中2，3‑环氧丙基三甲基氯化铵的异丙醇溶液中2，3‑环氧丙基三甲基氯化铵与异丙醇溶液的质量体积比为1g∶2mL；步骤三中2，3‑环氧丙基三甲基氯化铵的总加入量为2～27g；步骤四中粗制N‑2‑羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖与去离子水的质量体积比为1g∶25mL。