[发明专利]一种海洋油污微生物菌群的筛选和驯化方法及应用

摘要

本发明提供一种海洋油污微生物菌群的筛选和驯化方法，通过海洋油污发生地区获得菌源样品，而后经过一代，二代，三代富集培养，获得培养液，通过筛选富集，并经过一代，二代，三代富集培养获得富集培养液，再利用设计的装置，添加营养物质进行驯化处理后获得得到驯化微生物菌群，筛选好的菌群可用于海洋油污事故地区的油污生物降解。可在海滩溢油生物修复和驯化石油降解菌群中的应用。本发明方法具有快速，经济，高效，环保的特点，可以更快的应用于海洋油污事故，是海洋油污微生物筛选驯化方法的理想选择。

主权项

一种海洋油污微生物菌群的筛选和驯化方法，通过以下步骤实现：（Ⅰ）装置设计：装置由缸体（11）、隔板（3）、右温度计（4）、左温度计（5）、造浪器（6）、控温装置（7）和照明装置（8）组成，缸体（11）底部两边设有右出水管口（1）和左出水管口（9），并相应设有右水阀（2）和左水阀（10），在缸体中间设有一可卸载的隔板（3），将缸体（11）分隔成左右2个空间，在缸体两侧分别安装左温度计（5）和右温度计（4），缸体（11）右侧安装有可卸载的人工造浪器（6）和控温装置（7），造浪器（6）和控温装置（7）通过吸盘吸住缸体内壁，照明装置（8）安装在缸体上部，人工造浪器（6）、控温装置（7）和照明装置（8）分别通过插头连接外接电源；（Ⅱ）菌源样品采集：从静水层中收集水样，从油污泥表层中采集0.5‑1.0kg污泥样，分别置于无菌器皿中，在24小时内进行步骤（3）富集培养或4℃下密封保存； （Ⅲ）菌群富集：取水样10ml和污泥样品0.5g放于500ml一代富集培养基中，在25℃，140rpm下进行摇床富集培养一天时间，即获得一代富集菌群培养液；经过第一步的富集培养后，按照一代富集菌群培养液:二代富集培养基=1:10的比例，将一代富集菌群培养液添加到二代富集培养基中，在25℃，140rpm下继续富集培养一天，至油水混合现象出现，即获得二代富集菌群培养液；然后取二代富集菌群培养液，按照二代富集菌群培养液:三代富集培养基=1:10的比例添加到三代富集培养基中，在25℃，140rpm下继续富集培养，至油水混合现象出现，至此富集完毕，得到三代富集菌群培养液；其中一代富集培养基组成：酵母提取物                      1 g/L 蛋白胨                          5 g/L尿素                            1.6 g/LK2HPO4                            8 g/L油污                            5 g/L              海水                            1 LpH                              7.0±0.5  温度25℃；二代富集培养基组成：酵母提取物                      1 g/L 蛋白胨                          5 g/L尿素                            1.6 g/LK2HPO4                           8 g/L油污                            10 g/L               海水                            1 LpH                              7.0±0.5 温度25℃；三代富集培养基组成：酵母提取物                      1 g/L 蛋白胨                          5 g/L尿素                            1.6 g/LK2HPO4                           8 g/L油污                            20 g/L               海水                            1 LpH                              7.0±0.5 温度25℃；（Ⅳ）菌群驯化：将步骤（3）得到的三代富集培养菌群培养液按照体积比为1:100的比例加到盛有含油量质量体积比1%的油污废水的模拟装置右侧的油污废水中，同时按照浓度比生化需氧量:尿素:磷酸二氢钾=100:5:1将尿素和磷酸二氢钾混合，温度25℃，进行驯化处理，连续换水三次后，缸体（11）底部即为驯化好的微生物菌群。