[发明专利]一种利用激流式生物反应器悬浮培养动物细胞的工艺过程及控制方法

摘要

本发明公开了一种利用激流式生物反应器无血清培养动物细胞生产重组蛋白类药物的工艺过程及控制方法。该工艺采用流加基础培养液来提高细胞密度并扩大细胞培养体积。通过降低培养温度和流加浓缩的表达培养液来维持细胞密度和活率。从而高效、持续的获得重组蛋白。工艺控制方法主要针对不同细胞株生长代谢变化，对pH、溶解氧、温度变化进行在线监测；对细胞密度、活率、培养体系中葡萄糖、谷氨酰胺、氨、乳酸、渗透压进行定时检测。该方法特别适合大规模动物细胞悬浮培养。具有操作控制简单，传质传氧效率高，培养周期稳定、批次间结果差异小、生产成本低、容易实现大体积、高密度等优点。

主权项

一种利用激流式生物反应器动物细胞生产重组蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1).用激流式生物反应器无血清悬浮培养动物细胞，起始接种细胞密度为0.5×106～4×106cells/ml；根据细胞密度变化流加基础培养液进行扩增培养体积，使细胞密度维持在4×106～8×106cells/ml，当培养体积扩大到反应器最大培养体积的1/2～3/4时，开始将温度下降到30～35℃并流加浓缩培养液进行表达。(2).培养过程工艺参数针对不同的细胞株生长代谢需求，通过监测细胞密度及活率，细胞溶液中渗透压，以及葡萄糖、谷氨酰胺、氨、乳酸含量，来控制流加营养物质的速率。(3).蛋白降温表达过程中细胞由对数生长期进入平台期并维持7～21天，其产物浓度逐渐升高，当细胞群体生长处于衰退期且细胞活率在40～80％时，停止培养。