[发明专利]一种含HIPK2基因的重组质粒

摘要

本发明涉及一种含HIPK2基因的重组质粒，该重组质粒包含HIPK2基因的编码序列以及载体质粒DNA序列。其中载体质粒DNA序列包含与HIPK2基因可操作地连接的调节序列，该载体质粒是可以在宿主中复制和生存的真核表达质粒。该重组质粒的构建包括引物设计、PCR扩增、NheI和KpnI双酶切及纯化、目的片段和载体质粒的连接、连接产物转化大肠杆菌感受态细胞以及重组质粒酶切鉴定阳性克隆并测序等步骤。该重组质粒可用于HIPK2基因在肿瘤血管新生、增殖凋亡、侵袭转移中的作用机理的研究，以及基于HIPK2基因的抗肿瘤药物的开发和生产，从而提供预防和治疗肝癌、胃癌、结直肠癌等恶性肿瘤的新途径。

主权项

一种含HIPK2基因的重组质粒，其特征在于，该重组质粒包含HIPK2基因的编码序列以及载体质粒DNA序列，所述的载体质粒DNA序列中包含与HIPK2基因连接的调节序列；所述的重组质粒通过以下步骤构建：步骤1，以含有人HIPK2基因的真核表达载体pENTR223.1/HIPK2为模板设计引物序列，分别引入Nhe I和Kpn I酶切位点；步骤2，对HIPK2基因进行PCR扩增；步骤3，对所得HIPK2基因序列和载体质粒进行Nhe I和Kpn I双酶切以及纯化；步骤4，将步骤3所得产物进行T4 DNA连接酶酶切，使HIPK2基因目的片段和载体质粒相连接； 步骤5，用步骤4所得连接产物转化大肠杆菌感受态细胞；步骤6，将步骤5所得重组质粒进行酶切鉴定阳性克隆并测序。