[发明专利]一种利用氨肽酶法检测原料奶中嗜冷菌的方法

摘要

本发明公开了一种利用氨肽酶法检测原料奶中嗜冷菌的方法，该方法预先将原料奶离心处理，除去其中的脂肪层和水层，得到富含嗜冷菌菌体和乳蛋白质的沉淀物层；在无菌三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液中将沉淀物层中的嗜冷菌活菌体的氨肽酶与L-丙氨酸-对硝基苯胺直接进行氨肽酶反应，最大限度的保证了嗜冷菌的存活，然后再除掉体系中的乳蛋白，提取清澈的反应液，避免了预先提取嗜冷菌菌体而存在的活菌回收率高低的问题，减小了实验的系统误差，同时可利用待测液吸光值与嗜冷菌数量之间的对应关系，对原料奶中嗜冷菌的数量进行定量检测。

主权项

一种利用氨肽酶法检测原料奶中嗜冷菌的方法，包括步骤：(1)取两份相同且等量的原料奶，将两份原料奶均在温度为3℃～5℃和转速为8000转/分钟～10000转/分钟的条件下离心15分钟～25分钟，得到两份分为脂肪层、水层和沉淀物层的离心物；(2)分别除去上述两份离心物中的脂肪层和水层并收集沉淀物层，将收集的沉淀物层溶于pH值为8.0且浓度为0.1mol/L的无菌三羟甲基氨基甲烷‑盐酸缓冲液中，再加入L‑丙氨酸‑对硝基苯胺，相应的得到第一预处理液和第二预处理液；(3)将第一预处理液在35℃～37℃水浴振荡2小时～2.5小时，转速为100转/分钟～150转/分钟，得到待测液；将第二预处理液在0℃～2℃静置2小时～2.5小时，作为空白对照液；(4)将上述待测液和空白对照液按以下步骤进行相同处理：在待测液和空白对照液中分别加入pH值为4.5～4.7的醋酸‑醋酸钠缓冲溶液，均在38℃～42℃水浴9分钟～11分钟，然后于转速为3000转/分钟～3500转/分钟的条件下离心12分钟～18分钟，分别取上清液，过滤得到待测液的滤液以及空白对照液的滤液，以空白对照液的滤液做对照，在紫外分光光度计上测定待测液的滤液的吸光值；(5)通过吸光值与对硝基苯胺浓度之间的标准曲线，以及嗜冷菌数量与对硝基苯胺浓度之间的数量关系，得出原料奶中嗜冷菌的数量。