[发明专利]中药石蒜提取物中加兰他敏的毛细管电泳电化学发光检测方法

摘要

本发明提供了中药石蒜提取物中加兰他敏的毛细管电泳电化学发光检测方法，对加兰他敏的检测限为1.0×10-9mol/L，线性范围是2.5×10-7-5.0×10-5mol/L；比常用的质谱检测方法检测限低1-2个数量级，线性范围跨越二个数量级；吡啶钌电化学发光对加兰他敏灵敏检测；磷酸盐运行缓冲溶液实现加兰他敏高效分离；纳升级的进样量且不需要对待测样品进行衍生，中药石蒜提取物溶液经过滤稀释后直接用于检测，无需干燥再提纯等繁复程序。本发明首次将毛细管电泳电化学发光检测技术应用于中药石蒜提取物中加兰他敏的检测。

主权项

中药石蒜提取物中加兰他敏的毛细管电泳电化学发光检测方法，其特征在于步骤和条件如下：1.1待检品的制备1.1.1加兰他敏标准溶液的制备把加兰他敏标准品溶解于二次水中，制得加兰他敏标准品储备液，所述的储备液的浓度为为5.0mmol/L，储备液在4℃冰箱中冷藏保存；用二次水将加兰他敏标准品储备液稀释成浓度为2.0×10‑5mol/L的加兰他敏标准溶液；1.1.2石蒜提取物相关溶液的制备A.石蒜提取物溶液的制备将石蒜研磨成粉末，过40目筛；称取0.5g中药石蒜粉末，加入25mL质量分数为85％的乙醇，40℃条件下在超声池中超声10min，然后再用索式提取器萃取2小时，收集石蒜提取物溶液；石蒜提取物溶液用0.2μL浓度为12mol/L的盐酸中和后，用0.45μm的滤膜过滤，得到纯净的石蒜提取物溶液；B.石蒜提取物稀释溶液的制备由步骤A得到的石蒜提取物溶液用二次水稀释，获得石蒜提取物稀释溶液，加入二次水的体积是步骤A乙醇体积的5倍；C.石蒜提取物稀释加标溶液的制备向步骤A得到的石蒜提取物溶液中加入由步骤1.1.1获得的浓度为2.0×10‑5mol/L的加兰他敏标准溶液，用二次水稀释获得石蒜提取物稀释加标溶液，加入二次水的体积是步骤A乙醇体积的5倍；1.2检测步骤和条件1.2.1仪器装置内径50μm未涂层融硅毛细管；直径500μm铂盘工作电极；Ag/AgCl饱和参比电极；Pt丝对极；电化学发光综合分析仪，西安瑞迈分析仪器有限责任公司生产；1.2.2试剂加兰他敏的标准品，二次水；三联吡啶钌的六水合氯化物(Ru(bpy)3Cl2.6H2O)，NaH2PO4，Na2HPO4，NaOH，盐酸，乙醇，所用试剂均为分析纯；1.2.3溶液的制备所有配制好的溶液在使用之前均经0.45μm滤膜过滤；1.2.3.1背景电解质溶液的配制①磷酸盐缓冲溶液的配制配制浓度为200.0mmol/L的NaH2PO4和浓度为200.0mmol/L的Na2HPO4，将同浓度的二者混合再用二次水稀释配成浓度为100.0mmol/L的磷酸盐缓冲溶液，调整磷酸盐缓冲溶液pH值为7.50；②Ru(bpy)32+溶液的配制用二次水配制20.0mmol/L Ru(bpy)32+溶液；③背景电解质溶液的配制将步骤①制备的磷酸盐缓冲溶液与步骤②制备的Ru(bpy)32+溶液混合，用二次水稀释配制背景电解质溶液；背景电解质溶液中磷酸盐浓度为50.0mmol/L，Ru(bpy)32+浓度为5.0mmol/L；1.2.3.2运行缓冲溶液的配制配制浓度为200.0mmol/L的NaH2PO4和浓度为200.0mmol/L的Na2HPO4，将同浓度的二者混合，再用二次水稀释配成浓度为15.0mmol/L的运行缓冲溶液，调整运行缓冲溶液pH值为8.49；1.2.4检测步骤1.2.4.1分离毛细管的处理为了保证加兰他敏高效分离，灵敏检测及分析结果的重现性，需对毛细管做以下处理：新的毛细管柱用0.1mol/L浓度的氢氧化钠冲满过夜，使用前用0.1mol/L氢氧化钠活化10min，用二次水冲洗10min，然后用由步骤1.2.3.2获得的运行缓冲溶液平衡10min；1.2.4.2中药石蒜提取物的毛细管电泳电化学发光检测将步骤1.1.2中的步骤B得到的石蒜提取物稀释溶液和步骤1.1.2中的步骤C得到的石蒜提取物稀释加标溶液分别按下述条件进行检测：检测电位1.20V；进样时间10s；进样高压10kV；电泳分离高压13kV；检测池中添加步骤1.2.3.1制备的背景电解质溶液；电泳采用步骤1.2.3.2获得的运行缓冲溶液；采用1.2.1仪器装置：内径50μm未涂层融硅毛细管；直径500μm铂盘工作电极；Ag/AgCl饱和参比电极；Pt丝对极；电化学发光综合分析仪，西安瑞迈分析仪器有限责任公司生产；电化学发光采用柱端检测模式；光电倍增管偏置电压设定在800V；获得中药石蒜检测的电泳图谱。