[发明专利]抗魏氏梭菌病转基因植物疫苗及其制作方法

摘要

抗魏氏梭菌病转基因植物疫苗及其制作方法。目前免疫接种抗魏氏梭菌病的疫苗保护率较低。本发明包括：(1)以含编码魏氏梭菌毒素的质粒或病料为模板，利用PCR或RT-PCR扩增获得魏氏梭菌毒素基因，将获得的魏氏梭菌毒素基因和Ti或Ri质粒分别进行酶切，回收目的基因和植物表达载体片段，连接并转化大肠杆菌，对重组Ti或Ri质粒进行酶切、PCR和测序鉴定，用重组质粒转化根瘤农杆菌或发根农杆菌，筛选、鉴定阳性重组农杆菌；(2)植物种子经春化、萌发、剪接，获得外植体，用步骤(1)中重组的农杆菌分别侵染外植体，通过筛选、继代、生根、移栽，获得转化植株，筛选鉴定转基因阳性植株。

主权项

一种抗魏氏梭菌病转基因植物疫苗的制作方法，其特征是：该方法包括：(1)以含编码魏氏梭菌α毒素的质粒或病料为模板，利用PCR或RT‑PCR扩增获得魏氏梭菌α毒素基因，将获得的魏氏梭菌α毒素基因和Ti质粒分别进行酶切，回收目的基因和植物表达载体片段，连接并转化大肠杆菌，对重组Ti进行酶切、PCR和测序鉴定，用重组质粒转化根瘤农杆菌，筛选、PCR鉴定获得阳性重组根瘤农杆菌pA：已于2010年6月2日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC NO：M 2010130。(2)植物种子经春化、萌发、剪接，获得外植体，用步骤(1)中重组的根瘤农杆菌pA分别侵染外植体，通过筛选、继代、生根、移栽，获得转化植株，筛选鉴定转基因阳性植株，提取转基因植物基因组或蛋白进行Southern blot、Northern blot或Western blot鉴定，证明魏氏梭菌毒素在植物中得到表达。