[发明专利]香石竹茎尖超低温保存及植株再生的方法

摘要

本发明提供一种香石竹茎尖超低温保存及植株再生的方法，经过预培养、装载、脱水、冻存、化冻、恢复培养等步骤，获得恢复生长的再生香石竹植株。采用本发明提供的方法，香石竹再生率可达52.4％，香石竹茎尖玻璃化超低温保存方法设备简单、程序简化，易于操作，冻存效果好，保存后的香石竹恢复生长良好，遗传变异机率极小，是香石竹种质资源离体保存的一条有效途径。

主权项

一种香石竹茎尖超低温保存及植株再生的方法，其特征在于经过下列各步骤：A.将香石竹组培苗茎段置于下列预培养基上：MS+0.3～0.5mol/L的蔗糖+体积百分比为5％的DMSO+7g/L的琼脂，在光照强度为：1500～2000lx，光照时间为：8～12小时/天，温度为：22～28℃条件下，培养1～3天；B.取出A中预培养后的茎段，切取茎尖，放入下列装载液中：MS+2mol/L的甘油+0.4mol/L的蔗糖，装载30～40分钟；C.将茎尖从装载液中转移到下列玻璃化液PVS2中：MS+0.4mol/L的蔗糖+体积百分比为30％的甘油+体积百分比为15％的乙二醇+体积百分比为15％的DMSO，于0℃脱水处理40～60分钟；D.将C中的茎尖转移至与上述C相同的PVS2液中，于液氮中保存即可；E.将茎尖从液氮中取出于38～42℃水浴中迅速化冻，用下列去装载溶液：MS+1.2mol/L的蔗糖，洗涤2-3次；F.将洗涤后的茎尖接种在下列继代培养基上：MS+0.05～0.3mg/L的BA+0.05～0.5mg/L的NAA，在光照强度为：1500～2000lx，光照时间为：8～12小时/天，温度为：22～28℃的条件下，培养20～40天，至芽成活后，再转入上述相同的继代培养基上，在相同培养条件下，培养20～40天，即获得恢复生长的再生香石竹植株。