[发明专利]一种利用甘薯实生种籽培育无病无毒试管苗的方法

摘要

本发明公开了一种利用甘薯实生种籽培育无病无毒试管苗的方法，属甘薯有性杂交和组织培养方法。分析亲本遗传差异，筛选定向杂交亲本，通过嫁接和暗处理诱导开花，有性杂交获得甘薯实生种籽，结合组织培养，快速繁殖来源于实生种籽的试管苗，达到培育甘薯无病无毒试管苗的目的。本发明的有益效果是：将甘薯实生种籽和甘薯组织培养相结合，可以快速获得不同甘薯实生苗系无病无毒试管苗，为培养甘薯无病无毒种薯苗打下基础。

主权项

1、一种利用甘薯实生种籽培育无病无毒试管苗的方法，其特征是，利用甘薯实生种籽不带病菌不带病毒的特点，通过有性杂交获得实生种籽，结合组织培养，培育无病无毒试管苗，具体步骤如下：(1)甘薯有性杂交亲本的筛选：筛选甘薯高淀粉育种常用亲本，利用ISSR、AFLP等分子标记手段，结合田间农艺性状，分析常用亲本的遗传差异，筛选遗传差异大的材料做亲本；(2)甘薯亲本花蕾的诱导：利用茑萝、蕹菜等甘薯近缘野生种做砧木，嫁接亲本材料的薯苗，每天光照7-9小时，暗处理15-17小时，处理25-35天，诱导甘薯现蕾开花；(3)有性杂交实生种子的获得：前一天下午把即将开花的花蕾用纸袋套上，第二天上午分别取不同亲本的花粉，隔离定向授粉，并封闭花冠，经过30-40天，种子成熟，收获蒴果，去除萼片和果皮，获得有性杂交实生种子；(4)无病无毒试管苗培育：将实生种子沿种子底部刻去1-1.5mm见方的种皮，用蒸馏水冲洗干净，超净工作台内用70％酒精浸泡30s，0.1％HgCl2消毒3min，无菌水清洗3-4次，接种在PH5.8培养基上进行培养；所述的培养基的组分和用量是：MS基本培养基1L，蔗糖30g，琼脂7g；培养条件为光照2000-3000lux，14hr/d，温度29±1℃，试管18mm×150mm，每管装入培养基约10ml，铝箔封口；培养15-20天获得试管苗；将获得的试管苗接种到培养基上进行培养，所述的培养基为：每1L MS基本培养基添加0.3-0.5mg萘乙酸(NAA)、40g蔗糖和8g琼脂，其PH5.8；培养条件同前，每隔4-5周，将试管苗剪取单茎节段继代培养，获得相同来源的无病无毒试管苗。