[发明专利]一种快速检测海洋生物体内综合毒性的方法

摘要

本发明涉及一种快速检测海洋生物体内综合毒性的方法，该方法通过发光细菌的培养、生物样本的制备、发光细菌相对发光度的测定检测海洋生物体内综合毒性，发光细菌采用海水发光细菌—明亮发光杆菌T3变种(Photobacterium phosphoreum)，将海洋生物样本的上清液与发光细菌的菌液混合，通过测定发光细菌的相对发光度，判定所测样品的综合毒性，给出毒性级别，本发明简单、省时，能够快速检测海洋生物体内的综合毒性。

主权项

1、一种快速检测海洋生物体内综合毒性的方法，其特征在于，该方法步骤如下：一、发光细菌的培养：采用明亮发光杆菌T3变种(Photobacterium phosphoreum)制备发光细菌新鲜菌悬液：(1)斜面菌种培养：在新鲜斜面上接出第一代斜面，25℃±0.5℃培养24h后立即转接第二代斜面，25℃±0.5℃培养24h后再转接第三代斜面，25℃±0.5℃培养24h后备用；(2)摇瓶菌液培养：取第三代斜面菌种近一环，接种于装有30ml培养液的100ml烧瓶中，25℃±0.5℃，160r/min下培养24h备用；(3)将培养后的发光细菌新鲜菌悬液稀释至每毫升10⁸个～10⁹个细胞，初始发光度不低于800mV，备用；斜面和菌液的营养基为：胰蛋白胨0.5g  NaCl  3g   Na₂HPO4 0.5g   KH₂PO4    0.5g酵母    0.5g  甘油  0.3g 蒸馏水  100ml  固体培养基加琼脂  1.69g二、生物样本的制备：取生物样品10g，放入搅碎机打碎，加入50ml(V/V)0.1％的含二甲亚砜的人工海水，振荡30min，6000r离心6min，取上清液进行测试；三、发光细菌相对发光度的测定：测定时的室温要控制在20～25℃，同一批样品在测定过程中要求温度波动不超过±1℃；取若干试管，部分作为对照管的试管中每支加1.98ml的人工海水，作为样品管的试管中每支加入步骤二制备的生物样本上清液1.98ml，向每支试管中加入步骤一制备的备用的发光细菌菌液0.02ml，放入发光光度计中检测。