[发明专利]一种基于抗生素筛选转基因水稻种子的方法

摘要

本发明公开了一种基于抗生素筛选转基因水稻种子的方法，其内容有：A)利用抗生素筛选转基因水稻种子，首先是确定筛选用的抗生素浓度，其次是建立筛选条件和培育条件，最后是判定筛选的结果；B)转基因植株的基因型纯合杂合的判定方法：设目标基因未转化的受体亲本加抗生素和不加抗生素对照，转基因株系不加抗生素的对照，用抗生素筛选转基因株系种子，比较分析转基因株系加入抗生素的和两个对照的实验结果来判定转基因株系的基因型。本发明方法简便，可规模化分析，筛选结果准确，能获得外源目的基因高效表达的植株，效率高，成本低廉，可节约研究资源。

主权项

1、一种基于抗生素筛选转基因水稻种子的方法，它包括下列步骤：A、利用抗生素筛选转基因水稻种子，首先是筛选抗生素浓度确定：设定抗生素选择梯度，梯度为：0-1000mg/l，将未转基因的受体种子在其中萌发，幼芽生长被抑制的抗生素浓度为筛选抗生素浓度；其次是筛选条件：在2.5mm深，浓度的抗生素溶液中铺垫两层滤纸，浓度为卡那霉素400mg/l和潮霉素600ul/l，在其上均匀铺撒种子密度小于1个/平方厘米转基因水稻种子；阴性对照是未进行基因转化的受体种子，阳性表型对照为未加抗生素的受体种子；第三是培育条件，密闭空间条件下26-30度暗培养5天；第四是结果判定：结果出现三种情况的种子：①阳性表型：芽体正常，根生长旺盛，根长超过2cm；②阴性表型：芽体和根生长受到典型抑制，根长小于0.5cm；③萌发不正常的种子，没有发芽或者芽体不正常；B、转基因植株的基因型纯合杂合的判定方法：首先是设置对照：用未转基因的受体种子做一个加入抗生素的阴性表型对照和一个未加入抗生素的阳性表型对照；其次是按照以抗生素为基础筛选转基因阳性种子的方法为基础，判定转基因株系的基因型，在进行此株系的种子筛选时设置一个不加抗生素的对照即判断出来；第三是将加入抗生素的和没有加抗生素的对照实验对比，阳性表型率一致则此株系纯合，其后代也都为纯合；没有加入抗生素的对照高于加入抗生素的发芽阳性率，此株系为转基因杂合，其后代就有孟德尔分离；加入抗生素的表现为阴性，不加抗生素的为阳性表明此株系为非转基因株系；或直接统计筛选结果，阳性率为0，则为阴性纯合株系，阳性种子与阴性种子的比率符合孟德尔分离规律则为杂合型，阳性率接近100则为阳性纯合株系。