[发明专利]强成膜菌的制成和强化污水脱氮的方法

摘要

强成膜菌的制成和强化污水脱氮的方法，涉及到生物膜形成能力强的细菌的制成和利用该细菌强化污水脱氮的技术。从污、废水处理系统和天然水体的生物膜上分离筛选获得强成膜菌。在污水处理系统启动调试期，投加生物膜形成能力强的细菌与硝化细菌和反硝化细菌，总投菌量(湿重)为污水体积的0.1～2.0％(菌体湿重)，各类功能菌投入的重量比为强成膜菌∶硝化和亚硝化细菌∶反硝化细菌＝1～3∶2～5∶1～3，即可有效脱氮。强成膜菌的投加使载体上形成更厚的生物膜，提高了污水处理系统的脱氮效率；功能菌被固定于生物膜，减少了细菌的投加次数，降低了成本，也简化了管理。

主权项

1.强成膜菌的制成，其特征在于：从污、废水处理系统和天然水体的生物膜上分离筛选获得强成膜菌。分离筛选与培养方法是：第一步，强成膜菌的培养基组分培养基组分：蛋白胨5克，酵母粉2.5克，氯化钠5克，水1L，调节pH值为7.0～7.4。固体培养基加15～20克琼脂。第二步，生物膜上细菌的分离：将采集的附有生物膜的载体放入无菌三角瓶中，加入无菌生理盐水，在振荡器上振荡20分钟，洗下生物膜上的细菌，菌悬液经系列稀释后涂布未经稀释和稀释10和100倍的上述固体培养基平板，30℃培养1～3天，从各种平板上挑取单菌落，经反复纯化后的菌株放-80℃和4℃保存备用。第三步，强成膜菌的筛选：将第二步中分离获得的所有细菌菌株分别接种于上述固体平板，30℃培养24小时进行细菌活化，挑取活化的菌体再分别转接相同的液体培养基，30℃培养24小时，得到细菌悬液，在装有1毫升的上述液体培养基的玻璃试管中，分别接种10μL细菌悬液(OD600＝1)，30℃，100r/min振荡培养20～24小时，倒去培养液，用去离子水洗去未吸附的细菌，重复2次，加入0.1％(W/V)结晶紫水溶液2毫升染30分钟，倒出染色液用去离子水洗2次，自然干燥后，加乙醇/丙酮溶液(80∶20V/V)2毫升，洗脱吸附于生物膜上的染料，测定乙醇/丙酮溶液在570nm处的吸光值，根据吸光值大小评估生物膜量，从中筛选出成膜能力最强的3～5株细菌。第四步，强成膜菌的培养：将第三步中分离获得的强成膜菌分别接种于100毫升液体培养基中，30℃，100r/min振荡培养24小时，得到的细菌悬液按1～10％(菌体湿重/培养液体积)比例接种相同的液体培养基，逐级扩培，最终得到需要的细胞量。