[发明专利]喹诺酮类抗生素多残留酶联免疫检测方法

摘要

喹诺酮类抗生素多残留酶联免疫检测方法，属于抗生素残留检测方法技术领域。本发明利用合成的喹诺酮类抗生素多簇抗原免疫得到多克隆抗体，以喹诺酮类抗生素半抗原与卵清蛋白OVA的偶联物作为包被抗原，以喹诺酮类抗生素为标准品，建立动物性食品中的喹诺酮类抗生素的间接竞争酶联免疫检测方法；为喹诺酮类抗生素在动物性食品中的残留检测提供了快速高效的检测手段，由于采用的是多克隆抗体，费用较低并且稳定性和重复性较好，检测限(IC₉₀)为0.0126ng/ml、半数抑制量(IC₅₀)为0.54ng/ml和检测范围(IC₂₀～IC₈₀)为0.04467～14ng/ml。此外，还从方法的特异性、准确性、灵敏度来评估了本ELISA方法，符合多残留ELISA方法检测的要求。

主权项

1、一种喹诺酮类抗生素多残留酶联免疫检测方法，其特征在于利用合成的喹诺酮类抗生素多簇抗原免疫得到多克隆抗体，以喹诺酮类抗生素半抗原与卵清蛋白OVA的偶联物作为包被抗原，以喹诺酮类抗生素为标准品，建立动物性食品中的喹诺酮类抗生素的间接竞争酶联免疫检测方法；步骤如下：(1)以9％的生理盐水稀释包被抗原1∶100～1∶200作为包被液，加入酶标板中，每孔加入100μL，4℃孵育过夜，按照常规ELISA方法洗涤封闭；(2)将多克隆抗体以抗体稀释液按1∶100～1∶200比例稀释后，加入酶标板中，每孔加35μL；同时每孔分别加入用标准品稀释液稀释的0.001ng/mL、0.01ng/mL、0.1ng/mL、1ng/mL、10ng/mL、100ng/mL、1000ng/mL一系列浓度之一的喹诺酮类抗生素标准品或者添加待测样品，每孔加65μL，37℃孵育1h后以PBST洗涤液洗涤3～5次；(3)加入辣根过氧化物酶标记的羊抗兔GAR-HRP，以抗体稀释液按1∶1000～1∶3000比例稀释，每孔加100μL，37℃孵育1h后以PBST洗涤液洗涤3～5次；(4)配制显色液A液：配方为每100mL水中加入0.933g柠檬酸，3.68g Na2HPO4·12H2O，18μL 30％H2O2；B液：配方为60mg四甲基联苯胺溶于100mL乙二醇；使用前将A液与B液以4∶1体积混合；(5)每孔加入显色液100μL，37℃显色15min；每孔加入终止液2M硫酸溶液100μL，酶标仪450nm测吸光值OD。