[发明专利]一种含氰基拟除虫菊酯农药多残留分析的酶联免疫吸附检测方法

摘要

一种含氰基拟除虫菊酯农药多残留分析的酶联免疫吸附检测方法，属于免疫分析技术领域。本发明用半抗原间苯氧基苯甲氰醇丁二酸酯与卵清蛋白偶联复合物作包被抗原，加入待测含氰基拟除虫菊酯样品和间苯氧基苯甲氰醇丁二酸酯多克隆抗体后，包被抗原和待测含氰基拟除虫菊酯竞争与抗体反应，加入酶标二抗与被固定抗体结合，用洗涤液洗涤后加入显色液，用酶标仪检测OD值，与含氰基拟除虫菊酯标准品所作标准曲线对比，算出待测样品的含氰基拟除虫菊酯浓度。本发明能准确灵敏地检测待测样品中含氰基拟除虫菊酯类农药残留，样品的前处理过程简单，耗时少，能同时检测大量的样品，样品检测成本远低于传统的仪器检测方法，而且本发明方法稳定性好，无放射性污染。

主权项

1.一种含氰基拟除虫菊酯农药多残留分析的酶联免疫吸附检测方法，其特征在于：(1)抗原的包被用半抗原间苯氧基苯甲氰醇丁二酸酯与卵清蛋白OVA的偶联复合物作为包被抗原，以0.05M、pH 9.6的碳酸钠缓冲液稀释包被抗原1∶100～1∶200，浓度为4～8μg/mL作为包被液，在酶标板的每孔中加入100μL包被液，4℃孵育过夜，用含2％OVA的上述碳酸钠缓冲液作为封闭液封闭；(2)竞争反应将免疫制备的间苯氧基苯甲氰醇丁二酸酯多克隆抗体用抗体稀释液：含1％明胶、含0.5％吐温-20、pH＝7.4的磷酸盐缓冲溶液PBST，按1∶100～1∶200比例稀释后，加入酶标板中，每孔加50μL；同时每孔分别加入用标准品稀释液稀释的0ng/mL，0.1ng/mL，1.0ng/mL，10ng/mL，100ng/mL，1000ng/mL，10000ng/mL，100000ng/mL一系列浓度之一的含氰基拟除虫菊酯农药标准品，每孔加50μL，37℃孵育1h后以PBST洗涤液洗涤3～5次；(3)加酶标二抗加入辣根过氧化物酶标记的羊抗兔GAR-HRP，以抗体稀释液稀释为1∶5000，每孔加100μL，37℃温育1h后以PBST洗涤液洗涤3～5次；(4)显色每孔加入100μL显色液，暗处37℃反应15min，取出后每孔加入100μL、2mol/L的硫酸终止液，用酶标仪测定吸光值A450，与所作的标准曲线对比算出待测样品的含氰基拟除虫菊酯浓度。