[发明专利]用发根农杆菌遗传转化粘毛黄芩获得产黄芩苷的毛状根的方法

摘要

本发明提供了一种利用基因工程技术遗传转化粘毛黄芩，获得生产黄芩苷的粘毛黄芩的毛状根的方法。涉及包含发根农杆菌遗传转化粘毛黄芩的方法，遗传转化获得可生产黄芩苷的粘毛黄芩毛状根。其过程是用发根农杆菌遗传转化粘毛黄芩，获得了粘毛黄芩毛状根，经分子检测确为遗传转化的毛状根，HPLC检测表明遗传转化获得的粘毛黄芩毛状根能够生产黄芩苷。本方法可以为黄芩苷的生产提供一种新型可持续的新型药源。

主权项

1.一种获得产黄芩苷的粘毛黄芩毛状根的方法，特征在于采用转基因技术，用发根农杆菌遗传转化粘毛黄芩的器官，其步骤如下：(1)粘毛黄芩无菌外植体的获得；(2)采用转基因方法转移发根农杆菌的Ri质粒的T-DNA到粘毛黄芩细胞、组织、器官或植株中；其中转基因方法选择发根农杆菌Ri质粒介导遗传转化、基因枪法介导的遗传转化、花粉管通道介导基因转化或生殖细胞浸泡法介导基因转化；包括以下步骤：A、活化发根农杆菌；B、发根农杆菌浸染粘毛黄芩外植体；C、发根农杆菌与粘毛黄芩外植体的共培养，步骤如下：I、将侵染后的粘毛黄芩外植体接种在MS+AS 100μmol·L-1固体培养基上；II、置于温度为25℃±1.0℃恒温暗培养1～5天D、外植体的除菌培养；(3)粘毛黄芩毛状根的获得与继代培养；(4)粘毛黄芩毛状根的分子检测，方法如下：I、提取粘毛黄芩毛状根DNAII、获得含rolB和rolC引物的PCR反应体系；III、PCR反应扩增毛状根特有基因rolB和rolC；IV、电泳检测目标条带；(5)粘毛黄芩毛状根中黄芩苷的含量检测。